Способ получения солей гепарина из материала тканей животных Советский патент 1983 года по МПК A61K31/727 

S

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛЕЙ ГЕПАРИНА ИЗ МАТЕРИАЛА ТКАНЕЙ ЖИВОТНЫХ, включающий обработку мат.ериала тканей, очистку гепариносодержащего продукта и выделение солей гепарина, отличающий ся тем, что, с целью упрощения способа и увеличения выхода солей- гепарина, обработку материала тканей ведут путем добавления к пульпе ткани ионообменной смолы с последующим отделением ионообменной смолы от пульпы ткани, а очистку -гепарина ведут путем ионообменного извлечения гепарина из пульпы ткани при |рН 2-12 и .

О ел

ю

to

00

4; Изобретение относится к техноло гии получения органопрепаратов из животной биомассы и может быть использовано на эндокринных заводах и мясокомбинатах для получения гепарина. Известен способ производства гепарина, включающий следующие основные технологические операции: консервирование нативной мукозы (з мораживание, обработка бисульфи- том натрия, сушкд.) подготовку кон сервированной мукозы к процессу эк стракции гепарина (дефростация, отмывка:- замачивание в воде и раст ворах щелочей, солей); экст)ракцию гепарина раствором хлористогр натрия (iM) при рН 9,1-9,5. В процессе экстракции гепарина из слизистой оболочки тонкого кишечника сви ней реакционную смесь нагревают 10 мин до 5О-55 с, выдерживают при этой температуре 20 мин и затем температуру реакционных масс доводят до 95-100 С в течение 10-15-ми Охлажденную до смесь сбрасывают на нутч-фильтр и фильтрацие отделяют. экстрагент от с-коагулировавшейся мукозы. Жмых мукозы -на нутч-фильтре промывают ilM paCTsoром хлористого натрия и присоединя ют к экстракту. Экстракт охлаждают дают отстояться, освобождают от жи ра и направляют на ионообменнсЭе из влечение гепарина, которое ocyweствляют в .статических условиях ион обменной смолой АРА-М в С -форме. Для этого в 70 л экстракта вводят 3л анионообменной. cMOjjH И: при непрерывном перемешивании выдерживают 18-20 ч. Сорбент фильтруют и от мывают водой на нутч-фильтре. Зате проводят десорбцию гепарина. Отмытую анионообменную смолу загружают в стеклянную колонку и элюируют ге парин 2,5 М раствором хлористо О натрия при скорости элюирований 50 мл/см ч. Элюат озслаждают до 2-5 и направляют на выделение гепарина сырца Щ .. . Наиболее близким к предлагаемом являетсй способ производства гейарина 2 , который по своим основНым технологическим операциям по вторяет аналог, . Изложенная выше технология извлечения и производства гепарина обеспечивает выход формакопейного гепарина 20000-25000 ёд/kr сырья при ег.о активности 130-140 ед/мг. Известные способы производства гепарина характеризуются многостадийностью технологического процес са ббеспечивают получение гепарина-сырца, высокими энергозатратами на процесс нагревания реакционных MaccV нспользованием больших количеств солей хлористого аммония, хл ристого натрия, натриевой щелочи, аммиака, использованием ионообменного извлечения гепарина из экстракта от выщелачивания биомассы длительностью технологического процесса извлечен-ия гепарина низким .выходом целевого продуктаиз-за потерь со жмыхом мукозы и ферментативного разложения гепарина в процессах извлечения. Цель изобретения - упрощение способа и увеличение выхода гепарина. Указанная цель достигается со- . гласно получения солей гепарина из материалов тканей животных, включакяцему обработку материала тканей, очистку гепариносодержащего продукта и выделение- солей гепарина, обработку материала тканей ведут путем добавления к пульпе ткани ионообменной смолы с последующим отделением ионообменной -смолы от пульпы ткани, а очистку гепарина ведут путем ионообменного извлечения; i eпарина из пульпы ткани прирН 2-12 и 0-120°С. I ... - : . . : П р и м ер 1. 200, г замороженной скоагулированной муКозы влажностью 89,4% после дефрос тации направляют в гомогени за тор. и измельчают j Измельченную биомассу разбавляют водой 1:1 и дозируют Со- скорость } 100 4П/ч в апиарат .для.-протнвотьчаого сорбционного извлечения те11арина анионитом. рН биомассы в П1ЕЮцессе извлечения t-en-aPHMa подяерЖива ют ,в .различных сё;риях эксщер виа ита : на уровне ;7jO, а теьйтературу реакционных масс на уровне температуры окруясаювдей (20с). Объёмный расход анио«ита1(, транспорФирУищёго в аппарате рротйвотоком биомассе, : г подйёрживагот ргавным 12 мл/ч Обработанная биомасса на вых.оде из ионообменного аппарата г актически не содержит гепарина Ионит,отмытыЯ в специальном отсеке аппарата; направляют в непрерывно действующий противотрчный аппарат десорбции Десорбцию гепарина ведут М раствором хлористого натрия. При этом объемный расход сорбента поддерживают равным 12 МП/ч, а дёсор-; бирующеро раствора - 24 л/ч. с , целью перечистки гепарина элюат . разбавляют вдвое и гепарин повтбргно сорбируют из водного раствора на анионообменной смоле в указанный рыше условиях. Очищенный гепарин элюируют в режиме концентрирования в аппарате противоточногЬ типа 2,5м раствором хлористого натрия. Объемный расход ионита поддерживают равным 12 МП/ч, а десорбирующёго раствора - 24 мл/ч. Концентрация гепарина в элюате в среднем составляет 1.52,5 ед/мя. рН элюата устанавливают в пределах 6,0-6,5 и фильтруют раствор через мембранный , фильтр с диаметром пор 0,22-0,45 м Затем гепарин из элюата выделяют высаливанием, для чего элюат охлаждают -до добавляют к нему охлажденный до этиловый спир (96%) в соотношении к элюату 1:1 и оставляют в холодильнике на 1618 ч.для отстаивания осадка осадо гепарина отделяют на центрифуге, промывают. 4 раза этиловым спиртом, объем которого соответствует объему матрчника, и высушивают на воздухе до постоянного веса гепарин сушат в сушильном шкафу при 5560 С. Активность апирогенного гепа рина, полученного по приведенной выше технологии, составляет 170 ед/ на выход - 76000 ед, на 1 кг биомассы, . Пример. 2. Получают гепари как -в примере 1, но рН суспензии животной биомассы поддерживают рав ным 2,0, Активность полученного апирогенногЬ гепарина составляет 170 ед/мг, а выход 72000 ед на I кг биомассы, Пример 3, Получают гепари как в примере 1, но рН поддерживаю равным 12. Активность nojfy4eHHoro апирогенного гепарина составляе1г 170 ед/мг, а выход 78000 ед на 1 к биомассы, П р и-м ё р 4, Получают гепарин как в примере 1, но температуру .. суспензии животной биомассы поддер живают равной , Активность получанного апирогенного гепарина со ставляет 165 ед/мг, а выход 72000е на 1 кг биомассы. Пример 5, Получают гепарин как в примере 1, но температуру суа пензИИ животной биомассы и рН поддерживают равными cooTBisTCTBeHHO и 2. Активность апирогенного гепарина и выход соответству гот дан- ным.примера 2, Пример 6. Пблучают гепарин как.в примере 5, но температуру суспензии биомассы поддерживают равной 120.с. Активность полученного апирогенного гепарина составляет 140 ед/мг, а выход 6500 ед.на 1 кг биомассы. Пример 7, Получают гепарин как в примере 1, но температуру и рН суспензии животной биомассы поддерживают равными соответственно и 12. Активность полученного апирогенного гепарина составляет 140 ед/мг, а выход 60000 ед на 1 кг биомассы. Пример 8, 200 г легких крупного рогатого скота измельчают и разбавляют водой в соотношении 1:1. Пульпу водной биомассы дозируют со скоростью 100 мл/ч в аппарат для противоточного сорбциойногр извлечения гепарина анионитом. рН биомассы в процессе извлечения гепарина поддерживают на уровне 7,0, а .температуру реакционных масс - на уровне температуры окружающей среды {около 20°С). Объемный расход аниони.та, транспортирующегося :в аппарате противотоком биомассе, поддерживают равным 12 МП/ч, Обработанная биомасса на выходе из ионообменного аппарата практически не содёржит гепарина, Ионит, отмытый в специальном отсеке аппарата, направляют в секцию десорбции того же аппарата. Десорбцию гепарина ведут 2,5 М раствором хлористого натрия. При этом объемный расход сорбента поддерживают равным 12 мл/ч, а десорбирующего - 24 МП/ч, С целью перечистки гепарина элюат разбавляют вдвое и гепарин повторно сорбируют из водного раствора на анионообменной смоле в условиях, изложенных выше. Очищенный гепарин элюируют в режиме концентрирования в.аппарате противоточного типа 2,5 М раствором хлористого кальция, Объемный расход ионита поддерживают равным 12 мл/ч, а десорбирующего раствор.а - 24 мп/ч. Концентрация гепарина в элюате в среднем составляет 52,78 ед/мг. Далее процесс выделения кальциевой сопи ведут так же, как выделение натриевой соли гепарина в примере 1,. Активность апирогенного кальципарина, полученного, по описанной -вьйие технологии, составляет 150 ед/мг, а выход 27000 ед на 1 кг легких крупного рогатого скота. Предложенное изобретение позвояет увеличить расход гепарина из лоивотного сырья меньше, чём в 2,5 риза и наряду с сокращением затрат на гфоизводстэо гепарина получить с : каждого килограмма биомассы допол- ; нительно 300 мг. апирогенного гепаина. Таким образом, при потребно.с-: ти страны в гепарине 8,OilO° ед, i в год экономический эффект от внедрения предложенного способа состайляет 3,8 млн.руб.