Способ диагностики криза отторжения при аллотрансплантации почек Советский патент 1983 года по МПК A61B10/00 

ел ел 4

эо Изобретение относится к области ме динины, конкретно к ранней диагностике кризов отторжения при трансплантации / Известен способ диагностики криаа.;. .отторжения при аллотрансплантации почек путем определения глицинами динтрансферазы в сыворотке крови в послеоперационном периоде и путем исследования активности гаммаггглутамилтранспептидазы и лакгатдегидрогеназы в моче Щ Однако этим способом удается выя вить наступление {физа отторжения пере саженной почки , как правило, в пределах одних и тех же суток наступления клинического проявления реакции оттгоржения трансплантата. Целью изобретения является повышение достоверности ранней диагностики криза отторжения при аллотрансплантаци почек. Указанная цель достигается тем что согласно способу диагностики криза отторжения при аллотрансплантации почек путем определения содержания ферменто в моче определяют активность урокиназы в моче и при снижении ее показателей в 2-3 раза диагностируют наступление криза отторжения. Способ осуществляют следующим образом. Непосредственно перед началом проведения способа готовят смесь растворов фибриногена и тромбина Для приготовления раствора фибриногена в объе ме одной чашки Петри 6О мг фибриногена растирают в ступке, затем доба&ляют 10 мл боратно-солевого буфера с рН 7,4,,смесь встряхивают до полного растворения фибриногена. Кроме того Для одной чашки Петри готовят 0,2 мл тромбина, концентрацию которого под- бирают таким образом, чтобы О,1 мл раствора тромбина вместе с О,1 мл оксалатной плазмы крови здорового человека вызывал свертывание плазмы кров в течение 12-15 с. Для приготовления оксалатной плазмы соединяют одну долю (например, 1 мл) 1,34%-ного оксалата натрия и 9 долей (например, 9 мл) цельной рови и центрифугируют при 15ОО об/мин в течение 2 мин. Затем в ряд пробирок помещают навески тром бина в возрастающих количествах (1-23-5-7 мг) и прибавляют по одной доле , (например, по 1 мл) физиологического раствора. После этого из каждой пробир . ки переносят на предметное стекло по 0,1 мл оксалатной плазмь, перемешивая смесь палочкой, замечают время реакции для того, чтобы определить, из какой пробирки раствор тромбина свертывает плазму через 12-15 с, Приготовленную смесь из растворов фибриногена и тромбина вносят в равных объемах в две чащки Петрц , равномерно распределяют смесь растворов фибриногена и тромбина по внутренней поверхности чашки Петри. Затем обе чашки Петри оставляют при комнатной температуре до образования пленки. После этого одну чашку Петри (опытную) оставляют при комнатной температуре, а вторую (контрольную) помещают на 2О мин в сушильный шкаф при 92-95С цля превращения плазминогена в фибриноген, а затем охлаждают при комнатной температуре. Для осуш;ествления предлагаемого способа у больного берут 5-10 мл утренней мочи в центрифужную пробирку и центрифугируют ее при 15ОО об/мин в течение 1О мин. Надосадочную порцию мочи подщела- чивают (до рН 7,2-7,3) для нейтрализации уропепсина, так как в противном случае уропепсик переварит урокиназу,, Подщелачивание мочи производят добавлением к одной доле (например,- 1 мл) мочи трех долей (например, 3 мл) борат- но-солевого раствора. Затем на пленку, образовавшуюся в опытной и контрольной чашках Петри из растворов фибриногена и тромбина, наносят по одной кап- ле мочи и, закрыв чашки стеклянной, крышкой, помещают их в строго горизонтальном положении в термостат при 37 С на одни сутки. После этого определяют диаметр зоны лизиса в обеих чашках Петри, Активность урокиназы в моче выраэк,ают в единицах (мм в сут ки), которые вычисляют- по формуле: D,.D2 и . - , где1 - 3,14; Р и D - наибольшие диаметры зон лизиса в перпендикулярных направлениях. Определив площади зон лизиса в обеих чашках Петри, вычитают величину площади зоны лизиса в контрольной чашке Петри, Полученнузо разность сравнивают с разностью площадей зон лизиса при определении а стивности урокиназы в моче эдорового человека, которая равна в среднем мм /сут. При снижении J1O активнсх:ти урокиназы в два и более раза по сравнению с исходным уровнем определяемой ежесуточно в различные сроки после операции, диагностируют криз отторжения аллотрансплантата за су до развития клинической картины отторжения . Пример. Больной Р., 1956 г рождения. Клинический диагноз - хронический диффузный гломерулонефрит, хроническая почечная недостаточность 3-й степени. Показана трансплантация почки. До пересадки почки активность урокиназы в моче равнялась 1ОО мм /24 Больному Р, произведена операция пересадки трупной почки. Спустя четыре дня отмечено резкое снижение активности урокиназы в моче, достигшее через в моче, 6 дней 35 мм /24 ч, а спустя еще 5 дней снижалась до О. В этот же день клинически проявился криз отторжения пересаженной почки. Таким образом, у больного Р, за 7 суг; до клинического проявления криза отто жения трансплантата активность урокина зы мочи начала резко снижаться и за 5 сут до криза была в 3 раза ниже исходного уровня. 0 м е Р 2. Больной С., 1943 г, При Диегноз - хронический дифрожденияфузный гломерулонефрит, хроническая почечная недостаточность 2-й степени. До пересадки почки активность урокиназы мочи равнялась 20 мм /24 ч. Больному С. произведена трансплантация трупной почки. После этого активность урокиназы постепенно росла и через 10 сут составила 40 мм /24 ч, через 17 сут - 110 мм /24 ч, через 24 сут 12О MMV24 ч, через 32 сут 130 мм /24 ч и удерживалась на. этом уровне в течение 34 сут после операции (пересадки). Затем было отмечено резкое снижение активности урокиназы в моче. Через 4 сут после, этого было выявлено по данным клинико-лабораторных исследований наступление криза отторжения пересаженной почки. Таким образом, у больного С. за 4 сут до клинического появления реакции отторжения пересаженной почки активность урокиназы мочи в 2,1 раза снизилась. Способ позволяет с высокой степенью достоверности диагностировать криз от торжения почечного аллотрансплантата за 5-6 сут до клинических проявлений.

СГЮСОБ ДИАГНОСТИКИ КРИЗА ОТТОРЖЕНИЯ ПРИ АЛЛОТРАНО ПЛАНТАЦИИ ПОЧЕК путем определения содержания ферментов в моче, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности ранней диагностики криза отторжения, определяют активность урокиназы в моче и при снижении ее показателей в 2-3 раза диагностируют наступление криза отторжения.