Питательная среда для определения биологической активности грамидидина @ Советский патент 1983 года по МПК C12Q1/04 

О

сд ел

00 Изобретение относится к микробиологической промышленности и касает ся определения биологической. .активности антибиотиков методом диффузии в агар. Известна питательная среда для определения биологической активност грамицидина С, содержащая источник азота, натрий хлористый, калий хлористый, калий фосфорнокислый двузамеценный, агар-агар и дистиллирован ную воду . ij . Однако известная среда не обеспе чивает высокой точности определения из-за своих недостаточно хороших диффузионных свойств. Ценью изобрете.ния является повышение точности определения путем улучшения диффузионных свойств среды. Эта цель достигается тем, что питательная среда для определения биологической активности грамицидина С, содержащая источник азота, на трий хлористый, калий хлористый соль фосфорной кислоты, агар-агар и -г.истиллированную воду, в качестве источника азота содержит аммоний хлористый, а в качестве соли фосфор ной кислоты - натрий фосфорнокислый двузамещенный при следующем количес венном соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды: 9-И Аммоний хлористый 9-11 Натрий хлористый Калий хлористый . 19-21 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 4-6 Глюкоза ; 4-6 Агар-агар 18-20 Пример. ДЛЯ определения биологической активности грамицидина С используют среду следующего состава, г: глюкоза 5, натрий фосфорнокислый двузамещенный 5, хлорид аммония 10, хлорид натрия 10 хлорид калия 20, агар-агар 18, дистиллированная вода - до 1 л. рН среды после стерилизации 7,0-7,2. Среду расплавляют на водяной бане, охлаждают до 70 С и вносят 10 спор Вас. subtiEis шт. 6633 на 1 мл среды. Засеянную пмтательную среду разли:вают по 10-15 мл (один слой) в стерильные чашки Петри. После засты вания питательной среды делают лунк и подсушивают чашки при комнатной температуре 15-20 мин. Лунки заполняют контрольной (25 ЕД/мл) и испытуемой концентрацией грамицидина С в дистиллированной воде. Затем чашки помещают в термостат при . После 18-20-часовой инкубации замеряют размеры зон задержки ростатестмикроба и рассчитывают активность испытуемого образца по предварительно построенной стандартной кривой с использованием следующих концентраций грамицидина С: 15, 20, 25, 31, 25 и 37,5 БД в 1 мл дистиллированной воды. Пример 2. Для определения биологической активности грамицидина С используют среду следующего состава, г; глюкоза 6, хлорид аммония 11, натрий фосфорнокислый двузамещенный 6, хлорид натрия 11, хлорид калия 21, агар-агар 20, дистиллированная вода до 1 л. рН среды после стерилизации 7,0-1f2, Условия проведения анализа те же, что в примере 1. Пример 3. Для определения биологической активности грамицидина С используют среду следующегосостава, г: глюкоза 4 натрий фосфорнокислый двузамещенный 4, хлорид аммония 9, хлорид натрия 9, хлорид калия 19, агар-агар 19, дистиллированная вода до 1 л. рН среды после стерилизации 7,0-7,2. Условия проведения анализа те же, что в примере 1. Сравнительные данные по определению биологической активности грамицидина С в защёчных таблетках приведены в табл .; данные по диффузии антибиотика грамицидина С представлены в т,абл. 2. Полученные резуль.таты свидетельствуют о том, что определения на сравниваемых питательных средах, совпадают. Однако замена нестандартного бульона Хоттингера хлористым аммонием улучшает диффузию антибиотика в среду и позволяет получать большие по диаметру зоны задержки роста (табл. 2), что в свою очередь обеспечивает получение более точных результатов определения. Использование питательной среды позволит получать воспроизводимые стабильнне результаты благодаря стандартности среды и ее хорошим диффузионным свойствам, упростить приготовление среды и удешевить ее.

Т а 6 л -и ц а

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГРАМИЦИДИНА С, содержащая источник , та, натрий хлористый, калий хлористый, соль фосфорной кислозы, агарагар и дистиллированную воду, отличающаяся тем что, с целью повышения точности определения путем улучшения диффузионных свойств среды, дополнительно содержит глюкозу, а в качестве источника азота она содержит аммоний хлористый, а в качестве соли фосфорной кислоты - натрий фосфорнокислый двузамаценный прислед) количественнсм соотнсшюнии компонентов, г/л дистиллированной воды: аммонийхлористый 9-11, натрий хлористый 9-11, калий хлористый 19-21, натрий фосфорнокйс лый двузамещенный 4-6, гигар-агар 18-20.

Продолжение табл. 1