Способ дифференциации @ -форм холерных вибрионов и исходных бактериальных форм Советский патент 1985 года по МПК C12Q1/04 

ел

ел

оо Изобретение относигея к медицинской микробиологии и касается диагкосгики особо опасных инфекций. Известен способ дифференциации L форм холерных вибрионов и исходных бактериальных форм путем приготовления взвеси исследуемого материала, выращивания на питательной среде с последук шим исследованием выросших колоний путем приготовления микроскопических препаратов и исследования их с помощью фазовоконтрастного микроскопа ij . Однако известный способ не --обеспечивает высокой точности, так как L -фор мы холерного вибриона по морфологии колоний сходны с R -вариантами и под фазовым микроскопом могут обнаруживаться полиморфные и L -подобные клетки. Кроме того, известный способ позволяет проводить только качественную диф фepe щиaцию без количественного показателя состава популяции. Целью изобретения является повыше ние точности способа. Эта цель достигается тем, что согласно способу дифференциации t, -форм холерных вибрионов и исходных бактериальных форм путем приготовления взвеси исследуемого материала, выращивания на питательной среде с последующим исследованием выросших колоний, из выросших колоний готовят суспензии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 50-60 мин, определяют наличие . малонового диальдегида и по его концентрации дифференцируют L -ч})Ормы и их ревертанть первых пассажей и исходные бактериальные формы холерных вибрионов. Пример, Из колоний, подо- зрительных на 1, -форму, берут материал и готовят взвесь на трис - НСЙ -буфере. Суспензию инкубируют в термостате около часа при постоянном встряхивании. Реакцию останавливают О,1 мл 10О 6-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ), затем к пробам добавляют 2 мл 30%-ной ТХУ) О,2 МП 5 М соляной кислоты (НСС)и 2 м T),75%HioA тиобарбитуровой кислоты, сшвяг н, орячую водяную баню на 15 мин. При наличии в пробей.- форм хоиерного вибриона развивается окраска от ярко желтой до оранжевой. Интенсивность образующейся окраски .измеряют на спектрофотометре при длине волны 535 нм или на фотоэлектроколориметре с эетеным светофильтром. Количество образовавшегося малонового диальдегида вычисляют по формуле:( г-м Е« Ю СЖ Юз. 1,56.10.5 где С - концентрация малонового диальдегида, нмоль/млрд микробных клеток (м. кл.); Е - показания спектрофотометра (экстинция), 1, - молярный коэффициент экстинции для малонового диальдегида. В работу бьти взяты 7 штаммов L форм холерных вибрионов и их исходные варианты -3933, 3935, 3943 - серотипа Инаба, 4608,4616, 4617, 4661серотипа Огава. В таблице представлена дифференциация L - форм, ревертантов и исходных бактериальных форм в зависимости от конценчтраций малонового диальдегида. Концентрация малоноврго диальдегида (МДА) .выше 0,1 нмоль/млрд.м.кл. достоверно свидетельствует о наличии в пробе ревертантов холерных вибрионов, а выше ,6 нмоп;ь/млрд.м.кл - их L -форм Kov ичество МДА у бактериальных форм коебалось от О до О,06 нмольАшрд.м,кл, Минимальное количество L, -форм холерных вибрионов, которые можно определить соответствует 1 млрд,м.кл,мл, Использование изобретения позволит повысить точность определения, установить онцентрацию возбудителя в различной орме в одной популяции, кроме того, пределить в какой форме изменчивости иркулирует возбудитель.

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ L -ФОРМ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ И ИСХОДНЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ФОРМ путем приготовления взвеси исследуемого материала, шлрашивания на пвгательнсй среде с последующим исследованием выросших колоний, отличающий.с я тем, что, с целью повышения тч чности способа, из выросших колоний, готовят суспензии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 5060 мин, определяют наличие малонового диальдегида и по его концентрации цифференцируют L -формы и их ревертанты первых пассажей и исходные бактериальные формы холерных вибрионов.

. Концентрация малонового Штаммы диальдегида, нмоль/млрд.м.кл

i Продолжение таблицы