Способ определения активности глютатионредуктазы в эритроцитах Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 

.1 W

Изобретение относится к медицине, биологии и биохимии и может быть использовано при исследовании активности фермента глютатионредуктазы в эритроцитах человека и животных с диагностическими и лечебны целями.

Известен способ определения актиности глютатионредуктаэы-, основанНый на определении- скорости окисления НАДФН2 1 . .

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ определения активности глютатионредтазы, основанный на анализе биохимических данных Г2 .

Однако известный способ характеризуется недостаточной точностью определения, недостаточно объективен, так ка:к об активности глютатионредуктазы судят пс изменению концентрации НАДФН2г связанного соответственно с изменением концентрации GSSG, но эти же соединения могут участвовать во многих других фементативных реакциях в этой же инкубационной смеси, требует пповедения процесса гемолиза эгитроцитов, необходимо большое число операций.

Цель изобретения - повышение точности определения активности гЛютатионредуктаза.

Поставленная цель достигается, тем, что согласно способу опрёделения активности глютатионредуктазы в эритроцитах, в исследуемых эритроцитах методом электронного парамагнитного резонанса исследуют уровень семихинона фяавинадениндинукле отида (ФАД) и по его концентрации судят об активности фермента глютатионредуктазы.

На фиг.1 и 2 изображены спектрограммы семихинонов флавинадениндинуклеотидов.

Способ осуществляют следующим образом.

Из взятой у пациента крови общепринятым способом выделяют эритроциты и замораживают в жидком азоте (-196) в пресс-формах. Для определения активности фермента глютатиоредуктазы эритроциты выдавливают из пресс-форм и .помещают в кварцевый сосуд Дюара с жидким азотом, который устанавливают в резонаторе ЭПР-спектрометра. ЭПР-спектрометром исследуют уровень семихинона ФАД в данном образце эритроцита, по концентрации которогосудят об активности глютатионредуктазы.

Обнаружено, что в эритроцитах регистрируется сигнал свободного радикала в виде слегка асимметричного синглета с полушириной линии --12-15 Эр и 9/ 260035 (фиг.1 и 2), легко насыщающийся в поле СВЧ. Изме.ряя уровень свободных радикалов типа семихинона ФАД, суДим об уровне активности фермента глютатионредуктазы

Пример, У пациента А брали венозную кровь в объеме 1 мл, выделяли эритроциты и замораживали в жидком азоте. Затем эритроциты выдавливали из пресс-форм и помещали в кварцевый сосуд Дюара с жидким азотом, который устанавливали в резонаторе ЭПР-спектрометра и определяли уровень семихинона: ФАД, а значит, И активность глютатионредуктазы. Его величина составила 69,3 ед. (фиг.1).

П р и м а р 2. Те же операции проводили с пациентом Б. Активность глютатионредуктазы определяли аналогично примеру 1. Величина составила 111,3 ед. (фиг.2).

fln

g-Z,0036

Mn

13,23

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ГЛЮТАТИОНРЕДУКТАЗЫ В ЭРИТРОЦИТАХ, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения активности глютатионредукта зы, в исследуемых эритроцитах методом электронного парамагнитйого резонанса исследуют уровень семихинона флавинадениндинукледтида (ФАД) и по его Концентрации судят об активности фермента глютатионредуктаэы. (П ь ел оо 05 С35