Способ количественного определения М @ ( @ ) в биологической жидкости Советский патент 1987 года по МПК G01N24/10 

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано в медицине при количественном определении парамагнитных металлов в биологических жидкостях, например в слюне человека.

Цель изобретения - повышение точности.

Приготовление водного раствора Mn(II) в растворе человеческого альбумина и замораживание смеси в жидком азоте позволяют приблизить условия исследования Mn(II)

определяют концентрацию Mn(Il) в биологической жидкости, например в слюне.

Калибровочную кривую строят путем двойного интегрирования площади сигнала ЭПР модельных растворов Mn(II).

Условия записи спектров ЭПР: уровень мощности излучения СВЧ (сверхвысокой частоты) 10 дБ; внешнее магнитное поле Э; развертка 1600 Э; скорость развертки 100 Э/мин; высокочастотная модув смеси по предлагаемому способу к натив- Ю ляция магнитного поля 5 Э; постоянная вре- ным условиям нахождения Мп{11) в биоло-мени 0,3 с.

гической жидкости и к условиям исследования, что повыщает точность и объективность исследования.

Способ количественного определения . 5,15+0,87X10 М. Колеба ния Мп(11) Мп(11) в слюне методом ЭПР осуществляют в слюне составляют 12,24X10 - 0,90Х следующим образом.

Согласно предлагаемому способу определили концентрацию Mn(II) у 17 пациентов-. Концентрация Mn(II} в слюне М±гп

Приготавливают раствор Mn(II) в кон- :трации 7,1Х ,10Х М путем

центрации

хш- М.

Пример. Донор Ч-на, 30 лет. Взяли 10 мл слюны в пробирку. 0,4 мл слюны поместили в пресс-форму и заморозили в жидком азоте.

растворения MnCl24H2O в дистиллированной 2Q Образец выдавили из пресс-формы, помести- воде и раствор человеческого альбуминали в кварцевый сосуд Дьюара, последний

(300 мг альбумина в 10 мл дистиллирован- ной воды). Так как количество альбумина, необходимое для полного связывания Мп (II) в растворе не известно, ариготавливают

различной концентрации (15-200 мг в 10мл 25 ровочной кривой, составила 9,43X10 М дистиллированной воды) растворы альбу-(по способу-прототипу концентрация Мп (И)

мина и добавляют в них одно и то же количество (одинаковой концентрации Ю М) раствора Мп(11). Проводят запись спектра электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Установили, что концентрация аль- 30 50 раз бумина 75 мг на 10 мл дистиллированнойФормула изобретения

воды достаточна для полного связыванияСпособ количественного определения

Mn(II) в этом растворе (от указанной кон-Мп(11) в биологической жидкости путем

центрации кривая выходит на плато),. Эторегистрации спектров электронного нараже подтверждается и литературными дан-магнитного резонанса замороженного в

ными. Известно, что количество альбумина 35 жидком азоте исследуемого образца и конт- в крови человека колеблется в пределахрольного водного раствора известной конустановили в резонаторе ЭПР-спектрометра «Рубин и провели запись спектра ЭПР. Концентрация Mn(II), рассчитанная но предлагаемому способу с использованием калибсоставля т 4,0X10 М).

Предлагаемый способ по сравнению со способом-прототипом позволяет повысить точность и объективность определения в 30-

30-50 г/л. Таким образом, концентрация альбумина 300 мг на 10 мл дистиллированной воды вполне достаточна для полного связывания Mn(II) в этом растворе.

Для подсчета концентрации Мп(11) в биологическом объекте количественную оценку получают, проводя двойное интегрирование спектра ЭПР. По калибровочной кривой

центрации Мп(11) с последующей оценкой его содержания в исследуемом образце по калибровочной кривой, отличающийся тем, 40 что, с целью повышения точности, контроль- ный водный раствор Mn(II) известной концентрации готовят в растворе человеческого сывороточного альбумина с последующим его замораживанием в жидком азоте.

Составитель С. Рыков

Техред И. ВересКорректор В. Бутяга

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по де.пам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полнграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

определяют концентрацию Mn(Il) в биологической жидкости, например в слюне.

Калибровочную кривую строят путем двойного интегрирования площади сигнала ЭПР модельных растворов Mn(II).

Условия записи спектров ЭПР: уровень мощности излучения СВЧ (сверхвысокой частоты) 10 дБ; внешнее магнитное поле Э; развертка 1600 Э; скорость развертки 100 Э/мин; высокочастотная моду ляция магнитного поля 5 Э; постоянная вре- мени 0,3 с.

ляция магнитного поля 5 Э; постоянная вре- мени 0,3 с.

Согласно предлагаемому способу определили концентрацию Mn(II) у 17 пациентов-. Концентрация Mn(II} в слюне М±гп

Образец выдавили из пресс-формы, помести- ли в кварцевый сосуд Дьюара, последний

ровочной кривой, составила 9,43X10 М (по способу-прототипу концентрация Мп (И)

установили в резонаторе ЭПР-спектрометра «Рубин и провели запись спектра ЭПР. Концентрация Mn(II), рассчитанная но предлагаемому способу с использованием калиб ровочной кривой, составила 9,43X10 М (по способу-прототипу концентрация Мп (И)

50 раз Формула изобретения

составля т 4,0X10 М).

Предлагаемый способ по сравнению со способом-прототипом позволяет повысить точность и объективность определения в 30-

жидком азоте исследуемого образца и конт- рольного водного раствора известной концентрации Мп(11) с последующей оценкой его содержания в исследуемом образце по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, контроль- ный водный раствор Mn(II) известной концентрации готовят в растворе человеческого сывороточного альбумина с последующим его замораживанием в жидком азоте.

Изобретение относится к области клинической биохимии и может быть использовано в медицине при количественном определении, парамагнитных металлов в биологических жидкостях, например в слюне человека. Цель изобретения - повышение точности. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. 0,4 мл слюны помещают в пресс-форму, замораживают в жидком азоте и анализируют на ЭПР-спектрометре. Предварительно строят калибровочную кривую путем растворения различной концентрации МпС124Н2О в дистиллированной воде и с добавлением 0,2 мл этого раствора к 0,2 мл раствора человеческого альбумина. Приготовленные растворы замораживают также в пресс-форме в жидком азоте и анализируют в идентичных условиях на ЭПР- спектрометре. Условия записи: уровень мощности СВЧ-излучения 10 дБ; Э; развертка 1600 Э; скорость развертки магнитного поля 100 Э/мин; ВЧ-модуляция магнитного поля 5 Э; постоянная времени 0,3 с. В спектре ЭПР полученных образцов при температуре 77 К выявляется четкая сверхтонкая структура из 6 линий, характерная для Мп(1). Форма спектра ЭПР при фиксации Mn(II) на человеческий альбумин идентична форме спектра ЭПР слюны при 77 К. Для подсчета концентрации Mn(II) в биологическом объекте методом двойного интегрирования производят количественную оценку интенсивности сигнала Mn(II). По калибровочной кривой определяют концентрацию Mn(II) в биологической жидкости, в частности в слюне. .S а