Штамм @ @ ИФРЖ 2-продуцент биологически активных веществ женьшеня и способ получения биологически активных веществ Советский патент 1984 года по МПК C12N5/00 

Изобретение относится к хи фармацевтической промьппленнес может быть использовано в кос кой промьнпленности для приго (Ния кремов, лосьонов, а также ском хозяйстве. Известен способ получения нинсодержащих биологически ак препаратов при культивировани шеня на питательной среде .сло состава 1J. Известен штамм Рапах ginse продуцент биологически активн ществ женьшеня. Известен также способ полу биологически активных веществ культивирования штамма-продуц на питательной среде, содержа мг/л воды: 1650 1900 440 MgS04- 7HgO 370 170 KH2P04 6,20 HjBO, 22,80 MnSO 8,60 0,83 0,25 Na2MoO.- 0,025 CuSO 5H20 CoCl2 О, 025 27,80 FeS04 . 7H 0 Na ЭДТА 37,30 (натриевая соль этилендиам тетрауксусной кислоты), Тиамин (В)0,40 с -Нафтилукй с ная кислота (НУК) 2 Кинетин 1 Инозит80 Гидролизат казеина 500 Сахароза 310 Агар-агар . Однако известные технически решения не обеспечивают высоко логической активности целевого дукта. Целью изобретения является шение биологической активности вого продукта. Указанная цель достигается что при осуществлении способа ния биологически активных .веще предусматривающем выращивание продуцента на питательной сред держащей микро- и макросоли, с торы роста, сахар и агар-агар, с последующим вьщелением целевого продукта. Отличием является то, что в качестве продуцента используют штамм Рапах ginseng ИФРЖ2, а выращивание ведут на среде, содержащей, мг/л воды: 1145-1850 1490-2100 420-500 350-400 150-210 4,2-8,0 15,6-26,7 6,0-10,3 0,53-0,90 0,25-0,30 0,03-0,075 0,03-0,075 25,0-30,0 ,26,1-40,1 Na2 ЭДТА Тиаминбромид (Вт) 0,40-0,80 2,5 3,5- Ю Сахар 6-10 - 7 .10 Агар-агар oi-Нафтилуксусная 1,0 - 3,0 кислота Для осзпцествления способа предложен штамм Рапах ginseng ИФРЖ2 (коллекционный номер 1) - продуцент биологически активных веществ, которые связаны между.собой единым изобретательским замыслбм. Штамм Рапах ginseng ИФРЖ2 получен В Институте физиологии растений им. К.А.Тимирязева и хранится в коллекции культур растительных клеток данного Инстиута под номером 1. Штамм характеризуется следующими признаками. Штамм представляет собой кремовобелую, вьклую, оводненную клеточную массу со специфическим запахом и вкусом. Популяция состоит на 60-90% из клеток меристематического типа (с размером от 252 до 92,4 мкм) и на 2-10% из .клеток паренхимного типа (с размером от 75,6 до 201,6 мкм). Лигнификация составляет до 20% с образованием проводящих элементов. Ткань, растущая на среде, кз состава которой исключен одна из регуляторов роста - кинетин, гидролизат казеина и инозит, обладает хорошей интенсивностью pocta. Ростовой индекс составляет 19,5-16,5, содержание сухого вещества 3,3-4,0%. Цикл вьфащивания характеризуется S-образной кривой с лаг-фазой до 3-5 сут, фазой экспонекциального роста (5-10 сут), линейно фахой (10-33 сут), фазой замедления роста (32-35 сут) и стационарной фазой (35-37 сут). Кривая митотичес кой активности имеет двувершинный характер с максимумом в первую и тр тью недели. Среднее число хромосом, 7517,1 с вариацией от 41 до 136. Использование штамма ИФРЖ2 в качестве продуцента биологически акти ных веществ женьшеня и способ получения биологически активных веществ илггюстрируются следующим примером. Пример 1, В срлбы Э.рленмей ра емкостью 250 мл разливают по 50м предлагаемой питательной среды, сле дующего состава, мг/л воды: 1145-1850 1490-2100 420-500 CaCl 2Н20 350-400 MgS04 7H20 150-210 КНзР04 4,2-8,0 15,6-26,7 MnS04 4HjO ZnSO 7Н„0 6,0-10,3 KI. 0,53-0,90 Тиамин бро МИД (В,) 0,40-0,80 2,5 10 - 3,5-10f 6 -103 - 7.10 Агар-агар о(.-Нафтилуксусная 1,0 - 3,0 кислота при рН 5,8, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре в течение 15 мин. Затем в стерильных; условиях на поверхность агаризованной среды помещают 1 г ткани штамма Рапах ginseng ИФРЖ2. Колбы с инокулятом инкубируют при температуре 2бС и относительной влажности воздуха 70%. Цикл выращивания составляет 37 сут. По истечении выращивания, выросшую биомассу отделяют от агара, взвешивают. Сравнительные данные по выходу биомассы приведены в табл. 1.

Штамм Рапах ginseng ИФРЖ2 1 (хранится в коллекции культур растительных клеток Института физиологии растений им. К.А.Тимирязева АН СССР) продуцент биологически активных ве- , ществ женьшеня. 2. Способ получения биологически активных веществ путем выращивания штамма - продуцента на питательной среде, содержащей микро- и макросоли, -стимуляторы роста, сахар и агарагар с последующим вьщелением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения биологической ак ивности целевого продукта в качертве продуцента используют штамм Рапах ginseng ИФРЖ2, и выращивание ведут на среде, содержащей, МГ/Л ВОДЫ

Выход биомассы

По истечение гщкла выращивания биомассу весом 18,09 г отделяют от агара и высушивают в сушильном шкафу при температуре . Высушенную ткань измельчают до размера частиц 0,05-0,1 1-IM и используют в качестве целевого продукта.

Получение биологически активных веществ.

В перколятор (1,0 л) помещают 100 г измельченной сухой биомассы штамма ИЖФР2, заливают 500 мл 35%кого этанола до образования зеркалного слоя над сырьем и оставляют на срок до 24 ч. По истечении укаТаблица 1

занного срока экстракт перкалируют со скоростью 5 мл/мин с одновременным поступлением на сьфье 35%-ного этанола с такой же скоростью. Экстракцию продолжают до получения 1л найстойки. Полученную настойку оставляют в течение 2 дней, фильтруют и используют по назначению в качестве целевого продукта.

Фармакологические испытания биологически активных веществ из штаьгмов ИФРЖ и ИФРЖ2 проводились на нелинейных мышах-самцах.

Результаты представлены в табл. Сравнение биологической активности штаммов

отношение времени бега (в мин.) контрольных и опытных животных, %. условная стимулирующая единица действия, обеспечивающая повышение работоспособности на 33% от 1 г сырья.

Применение йЬвого щтамма-тродуцен-да биомассы, уменьшить на 39% затрата ИФРЖ2 биологически активньк ве-ты по получению 1 кг сухой биомассы ществ - панаксозидов женьшеня и спо- 20женьшеня по сравнению с известной соба получения панаксозидов позволя-средой и улучшить фармакологичесет повысить быход биологически актив-кие свойства целевогО| продукных веществ за счет повыщения выхо-та. Т а б л и ц а 2 ИФРЖ1 и ИФРЖ2