Способ определения белка в молоке и молочных продуктах Советский патент 1983 года по МПК G01N33/04 

СО 4i Изобретение относится к молочной промышленности, а именно к определе нию белка в молоке и молочных продуктах колориметрическим методом. Известен способ определения белк в молоке и молочных продуктах по св зыванию красителей, основанный на определении оптической плотности раствора краски до и после коагуляции белков, включающий смешивание молока с раствором красителя, последующее отделение белково-красочного компонента и колориметрирование фильтра l . Недостаток данного способа заклю чается в невозможности применения . их для определения белка в молочных продуктах, содержащих незначительно количество белковых компонентов (мо лочная сыворотка, молочный сахар). Известен также способ определени белка в молоке и молочных продуктах предусматривающий отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислым красителем и измерение оптической плотности 2 . Однако такой способ характеризуется недостаточной точностью, так как результаты опред.ения белка зависят от полноты осаждения его кислым красителем. В свою очередь полнота осаждения зависит от многих факторов:рН молока или молочного пр дукта, процентного содержания белко вых фракций, заряда этих фракций, к торые меняются в зависимости от лак тации, породы скота, кормления и т.д Оказывает влияние на полноту оса дения свойства и качество самого красителя и ряд других факторов. По этому при определении количества белка учесть влияние всех факторов на точность определения и сделать соответствующие поправки довольно трудно. Кроме того, данный способ определения белка может быть использован только для молока и молочных продуктов, имеющих значительное процентное содержание белка, и .совершенно не применим для определения белка в таких молочных продуктах, как молочная сыворотка и молочный сахар, где осадить полностью сывороточные белки практически невозможно ни одним из известных методов, тем более кислым красителем. Цель изобретения - повышение точности определения. Поставленная цель достигается тем что согласно способу определения бел ка в молоке и молочных продуктах, предусматривающему отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислым красителем и измр: ение оптической плотности, перед окрашиванием а-налиэируе 1уюпробу наносят на хромато графическую бумагу и фиксируют ее нагреванием, затем отмывают краситель, не связанный с белком, и элюируют связанный с белком краситель, а определение белка осуществляют в зависимости от оптической плотности связанного белком раствора красителя . Способ осуществляют следующим образом. Для анализа микропипеткой берут 0,3 мл средней пробы молока или какого-либо молочного продукта и наносят это количество на полоску хроматографическо.й бумаги марки М . Через 1 мин после того, как исследуемый раствор впитается хроматографической бумагой, полоску этой бумаги помещают в термостат при 100105°С на 5 мин. В результате высокотемпературного воздействия белки, содержащиеся в исследуемой пробе, коагулируют на волокнах хроматографической бумаги, образуя с ними прочное соединение. После этого полоску бумаги с нанесенными пробами помещают в один из известных белковых красителей на 5 мин при 20°С. Для -анализа молока и молочных продуктов, содержащих значительное количество белка (0,5% и выше), применяют краситель амидочерный 10Б, который готовят следующим образом: в 1 л воды вносят 2,08 г динатрийфосфата ( 2Н2О) и 15,8 г лимонной кислоты, после их растворения вносят 0,8 г амидочерного 10Б. Для анализа молочных продуктов с концентрацией белка ниже 0,5% и молочной сыворотки применяют краситель бромфенолблау, который получают растворением 0,2 г бромфенолблау и 1 г HgCl в 100 мл 2%-ной или же растворением 2 г , 10 г калолия и 1 г бромфенолблау в 1 л дистиллированной воды, через сутки красители фильтруют и используют. После окрашивания проводят операцию . отмывки красителя, не связанного с белками. При применении красителя амидочерный 10Б отмывку осуществляют в 7%-ном растворе уксусной кислоты, а при применении бромфенолблау отмывку проводят в 2S-HOM растворе уксусной кислоты. После промывки полоски хроматографической бумаги просушивают при 18-20с и хранят в темном месте до проведения колориметрированкя. Если же колориметрирование проводят сразу после промьтвки, то окрашенные пятна белка вырезают и для элюирования связанной белком краски помещают в 1%-ный раствор NaOH. Элюирование осуществляют в пробирках- на 20 мл в течение 5- . 7 мин до полного осветления кружков хроматографической бумаги, на которые была нанесена анализируемая проба молочного продукта.

Колориметрирование проводят с помощью кювет на 15 мл на любом фотоколориметре, например ФЭК-М, с синим светофильтром (длина волны 575-590 мм). Содержание белка (в процентах) находят по калибровочному графику, откладывая на оси ординат соответствующую найденную оптическую плотность. Построение калибровочного графика осуществляют общепринятым методом.

Таким образом, изобретение позволяет повысить точность способа, TcjK как его результаты совершенно не зависят от полноты осаждения бел ка под действием красителя. Все белковые компоненты раствора впитываются в хроматографическую бумагу и . фиксируются в ней высокотемпературной обработкой. В результате того, что белковые молекулы пробй, связанные с волокнами бумаги, удерживают около себя молекулы красителя, а

не коагулируют с ними, что имеет место в прототипе, появляется возможность улавливать исключительно малые количества белКа в молочных или каких-либо других продуктах, содержащих белок. При этом разрешающая способность (определяемый минимум белка, содержащийся в продукте и выраженный в %) предлагаемого способа превышает известный в том числе

0 арбитражный метод Кьельдаля и составляет для сыворотки 0,001%, а для молока 0,005% за счет улавливания значительно меньшего количества белка.

5 В таблице представлены результаты определения белка известными и предлагаемым методами.

Как следует из таблицы, предлагаемый способ имеет относительно

Q высокую точность по сравнению с аналогичными, наименьшую стоимость анализа, зкономит время и обладает высокой разрешающей способностью, превышающей арбитражный метод Кьельдаля,

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА В МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ,, предусматривающий отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислым красителем и измерение оптической плотности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, перед окрашиванием анализируемую пробу наносят на хроматографическую бумагу и фиксируют ее нагреванием, затем отмывают краситель, не связанный с белком, и элюйруют связанный с белком краситель,а определение белка осуществляют в зависимости от оптической плотности связанного белком раствора красителя.

Время, затраченное

на 10 анализов, мин

Ошибка метода, %

Разрешающая способность (определяемый минимум белка, содержащегося в продукте) , %

Стоимость одного

анализа, р0,22

80 б

25-30

60 45

3

Молоко 0,005

0,1

0,1 Сыворотка 0,001

0,02

0,06

0,04