Питательная среда для выделения гемокультур стрептококков Советский патент 1984 года по МПК C12Q1/04 

а

о

4

СО 11 Изобретение относится к медицине, в частнести fc бактериологической диагаостике стрептококкового сепсиса и септицемии. Известна питательная среда для выделения гемокультур стрептококков, содержащая питательную основу - перевар Хоттингера и мясную воду, стимулятор роста - дефибриннрованную кровь, глюкозу, хлористый натрий и воду 1. Однако известная среда не обеспечивает, высокой чувствительности. Целью изобретения является повышение чувствительности среды. Эта цель достигается тем, что питательная среда для выделения гемокультур стрептококков, содержащая питательную основу, стимул тор роста, углевод, натрий хлористый и дист лированную воду, дополнительно содержит гпутамин, натрий уксуснокислый и натрий би карбонат, в качестве питательной основы она содержит ферментативный гидролизат крови животных и гислотный гищюлизат казеина средней степени расщепления, в качестве етимулятора роста - экстракт кормовых дрожжей и в качестве углевода -. декстрозу нри следующем количественном соотношении ком понентов, г/л дидтшшированной воды: Ферментативный гидролизат крови живот7л О О ,2-0,0 Кислотный гидролизат казеина7,2-8,8 Экстракт кормовых дрожжей4,5-5,5 Декстроза4,5-5,5 Натряй хлористый2,7-3,3 Глутамин,0,2-0,3 Натрий укруснокислый0,9-1,1 Натрий бикарбонат1,75-2,25 Среду готовят следующим образом. Для приготовления 1000 мл жидкой питательной среды 32 г сухого порощка срещи растворяют в 1000 мл холодной дистиллированной воды, доводят до кипения и кшштят 2-3 Мин, затем среду фильтруют и разлива-, ют в пробирки по 10 мл, сте|жлизхют в автоклаве при 112° С в течение 30 мин. Для приготовления сухого порошка среды пользуются следующие варианты. Вариант 1. Ф.ерментат1{вный гидролизат кро ви животных (аминопептид) 7,2 г, кислотньш гидролизат казеина 7,2 г, экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) 4,5 г, глутамин 0,2 г декстроза 4,5 г, натрий хлористый 2,7 г, натрий уксуснокислый 0,9, натрий бикарбонат 1,75 г. Сухие .компоненты в указанных концентра1шях смещивают в шаровой мельнице. 432 Вариант 2. Аминопептид 8,0 г, кислотный гидролизат казеина 8,0 г, ЭКД 5,0 г, глутамин 0,25 г, декстроза 2,5 г, натрий хлористый .3,0 г, натрий уксуснокислый 1,0 г, натрня бикарбонат 2,0 г. Вариант 3. Аминонептид 8,8 г, кислотный гидролизат казеина 8,8 г, ЭКД 5,5 г, глутамин 0,3 г, декстроза 5,0 г, натрий хлористый 3,3 г, натрий уксуснокислый 1,1 г, натрий бикарбонат 2,25 г. Среды используют следующим образом. Пример 1. Среды 1, 2, 3 вариантов разливают по 10 мл в пробирки, вносят по 1,0 мл крови донора, искусственно зараженной различными дозами стрептококка группы А (1000, 100, 10 микр. тел/мл крови). В качестве контроля .используют мясопептонный бульон с глюкозой и сывороткой. Посевы инкубируют и учитывают рост. В табл. 1 представлены сравнительные даннь1е по чувствительности сред. Пример 2. 1 мл гепаринизированной крови бального, (из расчета 10 БД н 1 мл крови) засеваю г в пробирку с 10 мл жидкой питательной среды следующего состава, г: фер ментативный гидролизат крови животных (аминопептид) 8,0; кислотный гидролизат казеина средней cTeneiffl расщепления 8,0; жстракт кормовых фожжей 5,0; глутамин 0,25; декстроза 5,0; натрий хлористый 3,0; натрий уксуснокислый 1,0; натрия бикарбонат 2,0. Посев при 37С и через каждые 24 ч производят учет результатов путем высева из жвдкой питательной среды на плотную (5%-ный кровшюй мясопептонный агар) и приготовлением мазков, которые окраигавают по Граму и мшсроскопируют. На 7 сут независимо от наличия в яшдкой питательной среде видимого роста производят пересев гемокультуры в проШ1рку с 10 мл свежей питательной средам того яю состава и продолжают исследог ванне, как описано выше, в течение следуюшда 7 сут. При иеследоваюга 120 проб крови больных ревматизмом в активной фазе и подострвш септическим ждокардитом показатель высеваемости ш известной среде составляет 1,5%, на питательной среде - 10,8%. Биологические показатели предлагаемой среды (скорость. роста, чувствительность, эффективносл;) значительно превосходят известную отечественную питательную среду - .мясовептонньш .бульон с добавлением 0,2% глюкозы и 10% сыворотки и не уступают, а в ряде случаев и превосходят показатели импортной среды (бульон Тодд-Хейвита, производства фирм Оксоид и Дифко). В табл. 2 приведены результаты биологических н(Яи 1таний опытной и KOHT{Vv nbHbix

сред по показателям скоросп роста н чув.ствительности.

Более выраженные преимущества предлагаемой среды обтружиктасц при оценке ее качества оо параметрам роста, полученных в процессе {дтьтивврбвшия (см. табл. 3), так при использовании предлагаемой среды даштельносп лаг-фазы в 4 раз короче, чем иа Амоопйпошкии бульоне с добавлением 0,2 глюкозы н 1096 (аторотки и в 3,5 раза короче, чем на бульоне Тодд-Хейвита. На предлагаемой среде отмечается более выраякяшая

10670434

экспоненциальная фаза - 5,2 ч, в то время, как на бульоне Тодд-Хейвита она равна 4,4 ч, а на мясопептонном; бульоне - 4,4 ч.

В табл. 3 приведены значения параметров 5 роста Str. грА 4М 1115, полученных при вырашиваням на опытной к контрольных средах.

К Использование модифицированной питательtO ной среды позволит улучшить бактериологическую диагностику стрептококкового сепсиса за счет повышения чувствительности среды.

Т а б л и ц а 1

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕМОКУЛЬТУР СТРЕПТОКОККОВ, содержащая питательную. основу, стимулятор роста, углевод, натрий хлористый и дистшшировгтную-воду, отличающаяся тем, чго, с целью повыщения чувствительности среды, она дополнительно содержит глутамин. натрий уксуснокислый и натрий бикарбонат, в качестве питательной осжжы она содержит ферментативный гидролизат .крови животных :и кислотный гидролизат казеина среднее степени расщепления, в качестве стимулятора роста- экстракт кормотьи дрбжжет и в качестве углевода - декстрозу при следующем количественном соотношении когаюнентов, г/л дастиллировашюй воды: Ферментативный гищюлизат крови животных7Д-8,8 Кислотный гидролизат казеина7 -8,8 Экстракт кормовых 1фожжвй4,5-5,5 Декстроза4,5-5,5 Натрий хлористый2,7-3,3 (Л Глутамии0,2-03 Натрий уксуснокислый0,9-1,1 Натртга бикарбонат 1,75-2,25,

+ - напифе роста прн высеве на 5%-ный кровяной

агар.. (

- - отсутствие роста при высеве на 5%-ный кровяной агар.

2М 59

tr. pyodenes грА}4

10-

MyxfaHos

10

tr. pyogerw грА12

10

tr. egalactlae грВ12

S-84

10

tr. egalactiae rpB14

v-9

treptococus rpG

10№ 619912

Таблнца 2

10IO- 10

12

1010- 10

10

1010 10

10

10- 10

1010

1010- 10

10

, Штаммы

rpG

1-7

12

10

rpD

,

10

10

3,84,4

Предлагаемая среда035,20,521,31,16

-t - лаг - длительность лаг-фазы; t - экс - Длительность эксп енциальнс б, фазы, 4ac;jLtni(X4i максимальная удельная скорость роста; 4/)v)|t - . минимальное время генерации; {xi - оптическая плотность суспензии через 5 ч итсубахвш.

1-8

10

10

10- 8

Таблица 3

0,3

U

0,58

0,56

1,15

0,6