Способ получения флуоресцентного фосфатидилхолина Советский патент 1984 года по МПК C09F9/11 C09K9/02 C09K11/06 

Изобретение относится к химии фосфорорганических соединений, а именно к новому способу получения флуоресцентного фосфатидилхолйна, который может найти применение в качестве флуоресцентного зонда в молекулярной биологии и в медицине.

Известен способ получения флуоресцентного фосфатидилхолйна, а именно 1-ацнл-2- { ( 9-антроил ) -11-аминоундеканои;5-3п-глицеро-3-фосфохолина, который заключается в том, что 11-аминоундекановую кислоту метилируют абсолютным метанолом в присутствии концентрированной серной кисло1ы, образующийся с количественным выходом метиловый эфир 11-аминоундекановой кислоты подвергают взаимодействию с хлорангидридом антрацен-9 -карбоновой кислоты. Получающийся с-ВЫХОДОМ48 -ный метиловый эфир

N-(9-антроил)-11-аминоундекановой КИСЛО1Ы омыляют раствором гидроокиси натрия и образующуюся свободную N-(9-антроил)-11-аминоундекановую . кислоту (вызущ 79%) подвергают взаимодействию с лизофосфатидилхолином в присутствии тионилхлорида. Лизофосфатидилхолин получают ферментативным гидролизом фосфатидилхолйна яичного желтка фосфолипазой Aj с выходом 80%.. 1-Ацил-2-1М-(9-антроил) -11-аминоундеканоил1-sn-глицеро-3-фосфохолин получается с выходом 30% в виде желтоватой воскообразной массы. Продукт имеет следующие характеристики: Rf 0,4 в системе хлорофсфм-метанол-вода (65:25:4); спектр флуоресценции (в этаноле,Jk.«j36. 369 нм): Лmxvcfr.цспчй«..388,

407 и 430 нм СП .

; Недостаткг1ми указанного способа являются многостадийность процесса, и использование дорогостоящего фермента фосфолипазы АЗ.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к предлагаемому является способ получения флуоресцентного фосфатидилхолина, а именно 1-ацил-2- 11-(2-антроил )-ундекс1Ноил -sn-глицеро-З-фосфохолина, основанный на использоваНИИ природного фосфатидилхолйна и антрацена. Однако природный фосфатидилхолин яичного желтка предваритель,но подвергают гидролизу фосф.олипазой Aj. с получением лизофосфатидилхолина а антрацен ацилируют смешанным ангид РИДОМ додекан-1,12-диовой и ортокремневой кислот,, образующимся непосредственно в реакционной массе при смешении додекан-1,12-диовой кислоты с тетрахлоридом,кремния в нитробензоле в присутствии безводного хлористого алкмкаия. Далее образующуюся с выходом 41% 11-(2-антроил)-ундекановую кислоту подвергают взаимодействию с .лизофосфатидилхолином в. присутствии

N,N-био - (имидазол )кето.на в среде хлороформа.

1-АЦИЛ-2- 11-(2-антроил)-ундеканоил -8п-глицеро-3-фосфохолин выделяют препаративной тонкослойной хроматографией в виде желтоватой воскообразной массы с выходом 50%. Rf 0,4 в системе хлороформ-метанол-вода (65:25:4); УФ-спекгр/Хмдко, нм

d//: 265 (1,),,- 388 (1,1 х X 10 ); спектр флуоресценции (в этаноле , JV(,oje265 нм ); 4W . 455 нм.

Для использования полученного флуоресцентного фосфатидилхолйна в качестве флуоресцентного зонда его необходимо смешивать с природным фосфатидилхолйном в весовых соотношениях 1:10-200. Смес, содержащая флуоресцентный и природный фосфатидилхолины в соотношении 1:10, имеет следующие характеристики: Rf 0,4 в Системе хлороформ-метанол-вода (65:25:4) УФ-спектр ЛМАЧО /S.// 265/1500), 388 (110)} спектр флуоресценции (в этаноле,J. возб. 265 нм Л макс, испуск. 455 нм L23.

Недостатками известного способа являются многостадийность, использование дорогостоящего фермента фосфолипазы и дефицитного реагента карбонилдиимидазола.

Целью изобретения является упрощение способа получения флуоресцентного фосфатидилхолйна. .

Поставленная цель достигается тем что согласно способу получения флуоресцентного фосфатидилхолйна, заключающемуся в том,, что природный фосфатидилхолин подвергают взаимодейст, ВИЮ с антраценом в присутствии хлористого алюминия при их мольном соотношении, равном 1,0:1,1-1,5:1,82,5, в среде безводного дихлорэтана при .18-25°С.

Целевой.Продукт выделяют хромотографйей в виде.желтоватой воскооб.разной массы с выходом 78-80%.

проведении процесса при температуре, ниже реакция идет очен медленно. Повышение температуры выше приводит к некоторому уменьшению выхода целевого продукта вслед ствие большего образования нефлуоресцирующих продуктов, что осложняет очистку целевого продукта. Количество антрацена обусловлено тем, что при мольном соотношении фосфатидилхолин-антрацен, меньшем, чем 1:1,1, падает выход продукта реакции, а при мольном соотношении фосфатидилхолин: антрацен, большем, чем 1:1,5, увеличивается расход антрацена без увеличения выхода целевого продукта. При мольном соотношении фосфатидилхолин: хлористый алюминий меньшем, чем 1:1, реакция не идет, а при соотношении большем, чем 1:2,5, резко возраста

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО -ФОСФАТИДИЛХОЛИНА с использованием природного фосфатидилхолина и антрацена, отличающийс я тем, что, с целью упрощения способа, природгелй фосфатидилхолин подвергают взаимодействию с антраценом в присутствии безводного хлористого алюминия при их мольнс соотношении, равном 1:1л 1-1,5:1,8-2,5, в среде безводного дихлорэтана при 1825 С.. сл