Среда для получения пикнид с конидиями гриба @ @ @ Советский патент 1984 года по МПК A01N63/00 

Изобретение относится к сельско хоэяйртвенной микробиологии и може быть применено в фитопатологии, сельском хозяйстве, растениеводств микологии. Возбудитель аскохитоза сои практ тически не развивает на известньох средах для его культивирования пик ды и конидии. На них гриб образует вторичный мицелий, который мешает отделению пикнид и конидий от среды и затрудняет их использование. Пикниды с конидиями в больших количест вах необходимы для проведения искус ственного заражения растений сои пр ее селекции на устойчивость к аскохитозу, при выяснении цикла развити возбудителя с целью разработки мето дов защиты сои от заболевания. Известна среда - овсяной агар Cl содержащая, г: Овсяные хлопья 100 Агар30 Вода1000 Эта среда может быть использован 1для культивирования возбудителя аск хитоза, но имеет следующие недостат ки: невысокий выход пикнид с конидия ми; быстрое зарастание среды вторич ным мицелием, что затрудняет отделе ние пикнид с конидиями. Известна также среда С2, котора является стандартной для культивирования фитопатогенных грибов и име ет следуюций состав, г: Очищенный картофель 200 Глюкоза20 15-20 1000 мл Эта среда имеет следующие недостатки:невысокий выход целевого продукта;длительный период образования пи нид; быстрое зарастание среды вторичным мицелием, что затрудняет отделение пикнид с конидиями; н.еэкон омичность среды, так как для получения достаточного количества пикнид с конидиями необходиМО засевать большое количество пробирок, что ведет к большому расходу глюкозы и на это уходит много рабочего времени. Цель изобретения - повышение выхода и сокращение времени получения пикнид с конидиями гриба. Для достижения указанной цели среда для получения пикнид с конидиями гриба Ascochyta soJalcoIa Abramov, включающая агар, воду, дополнительно содержит пивное сусло, семена сои и измельче1 ные листья и стебли сои при следующем соотношении компонентов, мас.%: Пивное сусло 1,5-2,0 Семена сои Измельченные листья и стебли 0,5-1,0 сои 2,0-2,5 Остальное Пример 1. Берут неохмеленное пивное сусло, измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был равен 8%, затем сусло фильтруют. Семена, листь-я и стебли сои промывают в воде. Листья и стебли измельчают. Берут 2% семян сои, 0,5% измельченных листьев и стеблей сои, заливают их 50% водопроводной воды и варят при слабом кипении 40 мин на слабом огне. Жидкость фильтруют и восстанавливают объем водопроводной водой. Добавляют 3-8% пивного |сусла и 2% агара. Стерилизуют при 1 атм 30 мин, после чего вносят посевной материал. Затем инкубируют гриб при 22-25 С. На второй день начинается рост мицелия; мицелий скудный, пикниды образуются на 3-4-й день, количество их обильное. На 6-7-й день получают большое количество пикнид с эксудатом, с 60-70% двуклетнык спор на поверхности среды. Зарастание среды вторичным мицелием не происходит. Средние размеры конидий, мкм: 7,48т4,08± +0,25)10,04. Пример 2. Берут неохмеленное пивное сусло, измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был равен 8%. Затем сусло фильтруют. Семена, листья и стебли сои промывают в воде. Листья и стебли измельчают. Берут1,5% семян сои, 1% измельченных листьев и семян сои,заливают их 50% водопроводной воды и варят при слабом кипении 40 мин на слабом огне. Жидкость фильтруют и восстанавливают объем водопроводной водой. Добавляют 4-8% пивного сусла и 2,5% агара. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1. Рост мицелия начинается на второй день; мицелий скудный, обильное количество пикнид образуется на 3-4-й день. На 6-7-й день получают большое количество пикнид с эксудатом с 5560% двуклетных конидий. Зарастание среды вторичным мицелием не происходит. Средние размеры конидий, мкм: 7, 2)3,810,3)10, 06.

Пример 3. Берут неохмёленное пивное сусло, измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был равен 8%, Затем сусло фильтруют. Семена,листь и стебли сои промывают в воде. Листья и. стебли измельчают. Берут 1,5% семян сои, 0,5% измельченных листьев и стеблей сои, заливают их 50% водопроводной воды и варят при слабом кипении 40 мин на слабом огне. Жщ1кость фильтруют и восстанавливают объем водопроводной водой. Добавляют 4-8% пивного сусла и fcif агара. Дальнейшие операции проводят сбглаено примеру 1.

Рост мицелия начинается на второй день; мицелий скудный, на Э-4-й день образуется большое количество пикнид На б-7-й день получают большое количество эксудата с 60-70% двуклетных конидий. Зарастание среды вторичным мицелием не происходит. Средние размеры конидий, мкм: 6,8х4,0±1870,03.

Использование предлагаемой среды имеет значительные преимущества перед известной. I

в таблице дана сравнительная характеристика выхода целевого продукта на испытанных средах.

Из данных таблицы следует, что состав предлагаемой суслосоевой среды в примере 1 оптимален. Это выражается в большом выходе целевого продукта {пикнид и конвд(ий), в наибольшем количестве двухклетмых конидий, что свидетельствует о большей жизнеспособности их по сравнению с таковыми при росте гриба на известной среде, а также на средах в примерах 2 и 3 на 15 день роста в идентичных условиях. Кроме увеличения выхода целевого продукта, предлагаемая суслосоевая среда сокргицает время его выхода, предотвращает зарастание среды вторичным мицелием, затрудняющим отделение целевого продукта. Все это способствует быстрому получению жизнеспособного инокулюма возбудителя аскохитоза сои для селекционной работы по выведению устойчивых к аскохитозу сортов сои и для оценки существукицих методов защиты сои от аскохитоза.

87,3±5,6

321,9±3,4 241,1±1,8 221,6±2,9

24

70 55 60