(54). ШТАММ Arthrobotrys Lohga Mecht N1 ПРОДУЦЁЙТ ФЙЁРИНОЛИТЙЧЕСКИХ ФЕРМЕН-ГОВ
: ; .1 -
Изобретение относи.тся к микро- г биологической промышленности, в частности к п роизводству ферментных препаратов, может быть применено з. медицинской промышленности и представляет собой новый шта мм-проДу- цент протёолйтических ферментов. Известны различные виды мйкроорганиэмов, способные продуцировать протеолитические ферменты с фибринолитическими свсЬйствами.
Все фибринолитйч0скйе ферменты грибного происхождения обладают:пЬя-. мым фибринолитичёским и тромЬЬлити-; ческим действием. Только фйбринолйтические ферменты из Tri chothec i urn, roseum LK помимо прямого действия . обладают способностью активировать плазминоген, что ставит их в рЯд перспективных для клиники прШар атбв.
Наиболее бли.зким по технической сущности к предложенному является штамм плесневого сапрофитного гри$а Trlchothecium roseum LK - продуцирующий комплекс фибринолитических ферментов-трихолизин 1.
Недостаток штамма состоит в том, что он обладает недостаточно высокой фибринолитической активностью 0,5 г сырца с литра куЛьтуральной жйдкостк и невысокой активаторной iaKтивности. Кроме того, штамм необходимо культйви1ровать на средах, содержащих пищевые продукты (пищевой .сахар).
Цель изобретения - полученйё штамма более актив ного:продуцента фибри; ноЛйтйчёскйх ферментов (0,75 г сырца О с литра культуральной жидкости) с . : :а 1стиваторнЕ4мй свойствами из непато генных сапрофитных грибов Arthrobot: rys Longa Mecht N1.; . . Указанная цель достигается куль15 тивироваяием Arthrobotrys Longa
Mecht NI на .простой питательной dpeце, имеющей следующий состав, г/л: NaH2P04 2-3; KNOa 0,4-0,8, . 0,1: 0,3; caGOj, 0,1-0,3; Mgce 0,1-0,3;
.молочная кислогга 0,4-0,8; глицерин 5-15, вода водопроводная.
Полученный штамм Arthrobotrys Longa Mecht N1 является пл,есневым грибом и относится к классу Fungi
25 Imperfect, род Arthrobotrys, выде,лен авторами из почвы Новосибирской области, .депонирован в ко.гшекции лаборатории антибиотиков биологического факультета МГУ под 1, характеризуется следующими свойствами.
Морфологические признаки. При росте на агаризировэнной среде Чапека, включающей, г/л: NaNOg 3,0; КН2Р04 1, КСг 0,5; МдЗОд 0,5, сахарозу 25; агар-агар 20, воду водопроводную , принятой для культИвирбвания плесневых грибов в целях описания морфологических свойств и УстанЪвлений систематического положения, в течение 14 дней при 24°С образует широкорастуадую боЛУЮ п тиистую колонию, с возрастом розовеющую. 77На кШИдиеносцах, трудно отличимых от вегетативных гиф, формируются ма роконидйи грушевидной форШг::: 20-40 fii двуклеточные, с перегоФодкой ниже середины. Конидии прик | ШпЩн вЖймй йШсками к голоа-Кё .конидиеносца.
,На пептонно-кукуруэной среде, включающей, г/л: пептон 5,OJ глюкозу 10 ; NaCE 5,0; KjCO 0,5) кукурузный экстракт 5,0; агар агар-2б,0, водбпроводную воду, образует ишрокр растущую колонию, ватообразнуго,сйёг ё: 1зозОйей1Цую; макроконидии грушевидной фсзрМы, типичные для вида.
На сусло-агаре (5 БЛГ, агар-агар20,0 г) развивает широкорастутдие пушистые белые 1;солоний с розоватым б тёйКЬм воздушного мицелия. В центре вырЪсТы-столоны, представлен- ные слабо ветвятдимся, плоуным мицёлиемкремоватогр цвета. Обратная
йтОрона колонии морщинистая, с ради аЛьными складками, коричневатая.
Культуральные признаки. При росте в погруженной культуре р колбах на качалке, имеющей 240 об/мин, при 25-2б с в течение 144-168 ч на жидком сусле (4 БЛГ) у синтетической среде, включаюдей, г/л: NaH2PD4 2-3; HNO 0,4-0,8; МНдСЕ 0,1-0,3; СаСОз 0,1-0,3, Мд CPjO,0,3; молочную кислоту 0,4-0,8; глицерин 5-15, литр водопроводной воды, наблюдается образование мелкодисперсной густой массы; макроконидии образуются чрезвычайно редко.
Мицелий распадается на Отдельные
участкй, наблйДае ёй интенсивное
образование микроконидий, одноклеточfc« j«ifSi%« ;«,,
ных, величиной в 3-5 fu. Микроконидии образуются непосредственно на гифах вегетативного дацелия. Культуральна жидкость имеет вид разведенного молока, плохо фильтруется, пигментов внешнюю среду не выделяется.
Образование фибринолитических ферментов. Предлагаемый шламм образет фибринолитические ферменты в погруженной культуре в колбах на кача1Лке, имеющей 240 об/мин, при-25-26 е в течение 144-168.4 роста. Биосинте осуществляют в два этапа: выращивание посевного мицелия и собственнЬ биосинтез. .
Описание культивирования. Споры с сусло-агара- глубинное культивирование на среде, включающей, г/л: {NN4)250,) 0,4-0,8; К2НР04 0,8-1,2; КСе 0,25-0,75; МоОд 0,25-0,7; сахар пищевой 20-40; молочную кислоту 1-2; кукурузный экстракт 5-15, в качалочных.колбах объемом 750 мл с 200 мл питательной среды, в течение 36-48 ч при 24-26°С повтс5рный пересев на синтетическую среду (состав указан выше), условия культивирования 144-168 ч,
Фр бринолитическую активность определяют по методу Андреенко на фибриновых пластинах.Активацию плазминогена определяют по методу Андреенко по разности зоны.лизиса на непрот гретых и прогретых фибриновых пластинах.
На 144-168 ч роста гриба в культуральной жидкости устанавливается фибринолитическая.активность на уровне 300-400 мм, активаторная активность 200-250 мм.
Культуральную жидко сть отделяют центрифугированием при 8000- . 20000 об/мин в течение 5 мин при 4С. Фибринолитические ферменты осаждают охлажденным до -20С ацетоном из расчета 2 объема ацетона на 1 объем культурального фильтрата.
Сравнительные данные фибринолитической активности ферментов, выделяе /1ых в среды предлагаемым и известными видами грибов, представлены в таблице.
Аг th robo t гys Longa Mecht N1
Tri chothec i um rose urn
240-200
Синтетическая
120-80
Того же ct)c тава + сахар пищевой Формула изобретения Штамм Arthrobotrys Longa Mecht NI - продуцент фибринолитических ферментов. Морфологические признаки. Колони на среде Чапека имеют характерный фенртип-широкорастущие, белые, пушистие с возрастом розовеющие. На конидиеносцах, трудно отличимых от вегетативного мицелия, формируются двуклеточные грушевидные конид На сусло-агаре морфология колонии та же, обратная сторона колонии складчатая, коричневатая. Культурально-физиологичес сие при jaKK. На синтетической среде в погруженной культуре рост в виде гу гой мелкодисперсной массы, макроконидии практически не образуются. На мицелий, распадающемся на отдель ные участки, наблюдается интенсивное образование одноклеточных иикроконидий, имеющих величину 3-5/U. Фибринолитические ферменты образуют в глубинных условиях при росте на синГетической среде в колбах на качалке, имекяцей 240 об/мин при 25-2б С в течение 144-168 ч в количестве 0,75 г сырца с одного литра культуральной жидкости;плазминогена. Штамм обладает специфической способностью к активации плазминогена. Фибринолитическая активность на 144-168 ч роста гриба в культуральной жидкости составляет 300400 мм, а активаторная активность - 200-250 мм. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 469348, кл. С 07 G 7/02, 1973.
