Штамм нр-19продуцент коагулазы Советский патент 1978 года по МПК C12D13/10 

условиях рост в виде негустой бежевато-розовой массы, состоящей из шарико до 1 мм в диаметре. Встречаются склероции, окрашенные в темно-кирпичный цвет, размере до 1-2 мм. На синтетической среде, содеркапей в качестве источника углерйда и азота казеин, неокрашенная масса жйд ,кой консистенции состоит из отдельных нитей мицелия. На синтетической среде, содержащей в качестве источника углерода и азота фибриноген человека, Отдельные шарякк диаметром 1,0-3,0 t окрашены °в оранжев цвет. Культуральная жидкость соломенного цвета на синтетической среде,, содесжащей в качестве источника углерода ггаоко у, в качестве источника азота - гидролизат казеина, буроватая масса средней густоты, состошцая из шариков диаметром 0,5-1,0 мм. Культуральная жидкость цвета некрепкого чая. Физиолого-биохимические признаки. Оптимум роста 26-28 С. Хорошо усваивает глюкозу,. сахарозу, мальтозу. Лактозу, глицерин, органические кислоты. Из источников азота утилизирует нитраты, аммонийные соли, аГкшйокислоты, пептон, гидролиэат казеина. Может использовать в качестве един ственного источника азота и угЛерода казеин и фибриноген человека. Обладает эстеразной активностью в отношении тозиларгининметилбвого эфир Максимальная активность коагулазы обнаруживается в 48-72-часовой культуре гриба и достигает на сусле 6Б 480 усл.ед./мп, на полусин1 етйческой среде с пептоном 240-480 усл.ед./мп, на минеральной среде Чапека 120 усл. ед./мл. ктивное вещество осаждают из культуральной жидкости после отделения мицелия гриба фильтрованием. В качестве осадител можно использовать ацетон, этанол,, сернокислый аммоний . Пример. ШтакЕм Aspergi fua ocbtaceua НР-19 поддерживают в про бирках на агарцзованной среде Чапека при ксмнатной температуре. В качеств посевного материала используют суспензию конидий 7-10-суточной культур выращенной на 4Б-с9 слоагаре или агар Чапека. Гриб культивируют на качалках П{Я1 26-28 0 в колбах емкостью 750 мл со 100 мл среды в каждой, которая имеет следукядий состав, г/Л1 Глюкоза Пептон 0,5 рН 5,9-6 Вода водопроводная При росте на этой среде рН кульуральной жидкости остается без изенения, либо слегка сдвигается в ислую зону до 5,8-5,7. Максимальная ктивность 480 усл.ед./мл определятся в 48-часовой культуре гриба. ктивность коагулаэы определяют путем оследовательного двукратного развеения испытуемого раствора дистиллированной водой. 3aTeh% к 0,1 мл каждого р.аз ведения добавляют 0,4 мл цитратной плазмы человека., разведенной в 2 раза. После инкубации образцов в течение 18 ч при учитывают образование крепкого сгустка в максимальное разведении. Активность выражают в условных единицах на 1 wi испытуемого раствора. Реакция сопровождается контролем на спосо.бность плаэюа к спонтанному свершванию р и м е р 2. Культур} выращивают так же, как указано в примере 1, но на среде, имеющей следующий состав, г/л; Гидролизат казеина Глюкоза СэСЕг0,024 ,014 PeS040,015 HaHarW 4,4 Bciaa дистиллированная, рН 6,0. В процессе культивирования гриба среды подщелачивают даз 6,8-7,3. Активность коагулазы достигает максимальных значений (480 усл.ед./мп) к 72 ч культивирования. Активное вещество внщеляют из культуральной жидкости после отделения мицелия гриба, приливая к 1 объему культуральной жидкости 2 объема охлажденного до -20 G ацетона. Выпавший осадок Отделяют центрифугированием, растворяют в дистиллированной воде, диализуют и лиофильно сушат. Таким образ еж, предлагаемой штамм не патогенен, при работе с ним можно выделять целевой продукт из культуральной жидкости выход коагулазы достаточно высокий. Формула изобретения. Штамм A&pergt fud ockt ceceus НР-19 продуцент коагулазы хранится в коллекции Культур кафедры микробиологии биологического факультета МГУ 0 пбд номером 19. Культурно-морфологические признаки. Толщина конидиеносцев до 10 мкм,, высота 400-700 мкм. Размер вздутий 15-37x25-37 мкм, стеригмы двухъярус5ные, размер 1 яруса стеригм 2,0-3,Ох И 9 4 У° - 15-2,5х КОНИДИЙ 2,5-3,0 мкм, шиповатые, окрашенные а кирпичный цвет о попушаровидные. Агар Чапека. При 26-28с на седьмые сутки роста диаметр колоний достигает 3,1iL° плоские, приподнятые в центре в виде хохолка, с выраженной зональностью в окраске от медовожелтого до цвета охры в центре. Края колонии ровные, не погруженные в агар - сторона колонии цвети СЛОНОВОЙ кости, с возрастом темнеет. Радиальная ск 4адчатость выражена слабо. Сусло 6Б. При 2б-28 е на 2-3 рутки рост интенсивный, в виде бурова той масса, состоящей из шарико от «г5-1,0 иш в диаметре. Толщина нитей мицелия достигает 2,5-4,0 мкм. Синтетическая среда, содержащая в качестве источника углерода и азота казеин. Неокрашенная масса жидкой консистеиции СОСТОИТ из отдельных нитей мицелия. Синтетическая среда, содержащая в качестве источника углерода и азота фибриноген человека. Отдельные шарики диаметром 1,0-3,0 мм окрашены в оранжевый цвет. Культуральная жидкость соломенного цвета. „ « «тическая среда, содержащая в качестве источника углерода глюкозу, в качестве источника азота - гидролизат казеина. Буроватая масса средне густоты, состоящая из шариков диаметрем 0,5-1,0 мм. Культуральная жидкость цвета некрепкого чая. Физиолого-биохимические признаки Оптимум роста 26-28с. Хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, глицерин, органические кислоты. Из источников азота утилизирует нитраты, аммонийные соли, аминокйслоты, пептон, гидролизат казеина. Может использовать в качестве единственного источника азота и углерода казеин и фибриноген человека. Обладает эстеразной активностью отношении тозиларгининметилового фира.