Способ исследования протеолиза Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

а со

со Изобретение относится к медицин и биологии, в частности к методам исследования желудочной секреции. Известен способ определения про теолитической активности извлеченного из желудка сока в искусственных условиях путем термостатирования смеси разведенного в 100 раз желудочного сока и раствора беЛка известной концентрации и пН при 37 Точность такого способа высока и составляет +2% Cl3Недостаток указанного способа з ключается в том, что исследуется протеолитическая активность извлеченной порции желудочного сока, чт не может характеризовать истинную суммарную активность всего желуДЬч ного секрета. Искусственные услови созданные для прохо}(сдения протеоли ческой реакции, не соответствуют условиям естественного пищеварения Известен также способ определения протеолитической активности же лудочного сока непосредственно в желудке С21. Однако данный способ не позволя определять динамику изменения протеолитической активности в течение исследования, а лишь только суммарный результат в конце исследова ния. Цель Изобретения - контроль за динамикой расщепления белка непо.средственно в желудке. Указанная цель достигается тем, что согласно способу исследования протеолиза,. включающему введение белка через зонд в желудок с последующим извлечением содержимого желудка и определением степени расщеп ления белка в антральный отдел желудка вводят дополнительно зонд, .белок с заданной концентрацией и ве личиной рН вводят в этот зонд, далее непрерывно перекачивают содержи мое из антрального отдела желудка в кардиальный через промежуточную наружную емкость, периодически определяют концентрацию белка и величину рН содержимогоемкости. Способ осуществляют следующим образом. Натощак больному вводят в желудо два желудочных зонда диаметром 4 5 мм с металлическими метками на конце. Зонды под рентгеновским конт ролем устанавливают так, чтобы отверстие одного открывсшось высоко в кардиальном i, второго в антральном отделахжелудка. Из желудка откачивают по длинному зонду все содержимое желудка и затем вводят- по короткому зонду 200 мл 2%-ного расгво ра овоальбумина с рН 5,0 и подкрашенный 1 мл 0,5%-ного раствора фенолрот. К обоим каналам зонда подключают перистальтический насос и непрерывно перекачивают содержимое из длинного канала в короткий через промежуточную наружную емкость в которой производят непрерывное измерение рН стеклянными электродами, подключенными к рН-метру. Показания рН -метра записывают самописцем КСП-4, подключенным к соответствующим гнездам рН -метра. Периодически, раз 5 в мин. из наружной емкости отсасывают 4 мл. На фoтoэJJeктpoкoлopиметре при длине волны 590 нм опре- деляют концентрацию фенолрота. Затем к 2 мл этой порции приливают 2 мл реактива фолина в оазвелении 1:10 и 1 мл 1,2%-Horo.NaOH в соответствии с принципом метода АнсонаМирского. К вторым 2 мл порции добавляют 2 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты, тщательно перемешивают и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин. Из надосадочной жидкости отсасывают 2 мл и такжедобавляют к ней 2 мл реактива фолина в разведении 1:10 и 1 мл 1,2%-HoroNaOH. Через 15 мин после приливания упомянутых реактивов определяют интенсивность окраски растворов на спектрофотометре при длине волны 560 нм. По разности концентрации в пробах с осаждением и без осаждения белка определяют процент его расщепления. Результаты выражают в процентах. По изменению концентрации фенолрот в пробах определяют приблизительно объем секретируемого сока. Определив таким образом динамику расщепления белка в течение 1 ч (12 проб), отсасывают полностью все содержимое из желудка и определяют суммарный объем секрета, концентрацию белка, процент его расщепления и рН по описанным способам. Сразу же после отсасывания желудочного содержимого вводят по короткому зонду 200 мл 2%-ного раствора овоальбумина с рН 5,0 и 1 мл 0,5%-ного фенолрота. Вводят необходимый стимулятор секреции (гистамин, инсулин, и т.д.) и полностью повторяют описанный процесс. В зависимости от потребностей исследования проводят также и третий цикл с другим стимулятором секреции. На основании полученных данных строят графики динамики расщепления белка в различные стадии исследования, а также дебита кислоты. Пример. Больному В проведено сследование внутрижелудочного проеолиза. Натощак в желудок вводят вухпросветный зонд и аспирируют екрет из желудка (60 мл рН 1,95). о короткому каналу зонда вводят в ардиальный отдел желудка 200 мл %-ного раствора овоальбумина с рН ,0 и покрашенный 1 мл 0,5%-ного енолрот. Периодически для лучшего

перемешивания раствора часть секрета отсасывают по длинному каналу зонда и тут же вводят по короткому. . Раз в 5 мин аспирйруют 5 мл содержимого, в которых определяют рИ, 1гонцентрацию фенолрот (спектрофотометрически концентрацию белка и концентрацию нерасщепленного белка методом Ансона-Мирского. К 1 мл секрета приливают 1 мл 1,20%-ного NaOH и 1.МЛ реактива Фолина (1:10/. Синюю окраску раствора оценивают на спектрофотометре. При определении концентрации нерасщепленного белка

мин

5 10 0,6 0,8 0,9 1,01,0 2,5

Суммарный объем секрета составил 360 мл. Потери через привратник 20 мл. Результирующий рН 1,5.

На основании полученных данных строят график внутрижелудочного протеолиза и кислотопродукции.

предварительно к 1 мл секрета приливают 1 МП 10%-ной трихлоруксусной кислоты, центригируют при 1500 об/мин 15 мин и из надосадочной жидкости отсасывают 1 мл раствора для реакции

Ансона-Мирского. По окончании исследования отсасывают все содержимое и определяют суммарный объем, рН. По концентрации фенолрот устанавливают потери раствора через привратник.

Результаты исследования протеолиза

за 5 мин, %:

20

25

35

40

30

0,71,0 2,0 0,8 1,1 1,4 1,0 0,4 0,3 0,3 0,2 0,4

6.0 8,1 7,0 7,4 8,1 8,0

Предлагаег ьлй способ позволяет определять динамику протеолиза внутри желудка при белковой и других видах стимуляции с высокой точностью и одновременно дебит кислоть.

СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОТВОЛИЗА включающий введение белка через зонд в желудок с последующим :извлеченнем содержимого желудка и определением степени расщепления белка, отличающийся тем, что, с целью контроля за динамикой расщепления белка непосредственно в желудке, в антральный отдел желудка вводят допслнительно зонд, белок с заданной концентргщией и величиной рН вводят в этот эонл далее непрерывно перекачивают содержимое из антрсшьнрго отдела желудка в кардиальный через промежу.точную наружную емкость, периодически определяют концентрацию бел9 ка и величину рН содержимого емкосIw ти.