Способ обнаружения пилей адгезии у микробов рода @ Советский патент 1984 года по МПК C12Q1/04 

4;

со

4

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается спосбов обнаружения пилей адгезии у Jersinia pestis.

Известен способ определения пилей адгезии у микробов рода Jersin в частности Jersinia enterocolitiса, путем пассирования микроорганизмов на питательных средах - в 10-кратные пассажи в бульоне через 7 дней при , с последующей постановкой реакции агглютинации с эритроцитами в присутствии D-маннозы и учетом результатов 13.

Однако известный способ не позволяет выявить пили адгезии - детеминанты патогенности Jersinia pestis.

Цель изобретения - выявление пилей адгезии-детерминантов патогенности lersinia pestis.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения пилей адгезии у микробов рода Jersinia путем пассирования микроорганизмов на питательных средах q последующей постановкой реакции агглютинации с эритроцитами в присутствии D-маннозы-и учетом результатов, пассирование проводят 34 раза при 35-37°С через 36-48 ч н питательной среде, содержащей, г/л Дрожжевой экстракт 9-12 Триптон-бакто , 9-12 . К-, заминовые кислоты9-12Сердечно-моз говой отвар9-12 Глюкоза 10-15 Сернокислый магний 0,04-0,0 .Сернокислое железо 0,075-0,125 Цистеин 0,5-0,75 Лимонно-кислый

натрий1,0-1,4

Хлористый калий 1,5-2,5 Двузамещенный

фосфат калия 3,5-4,5 Агар-агар13-14

Вода дистиллированнаяОстальноеи рН среды7,1-7,3 Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. На питательной среде, содержагцей, г/л:

Дрожжевой экстракт 9,0 Триптон-бакто 9,0 Казаминовые кислоты 9,0 Сердечно-мозговой отвар9,0 Агар-агар 13,0 Глюкоза 10,0 Сернокислый магний 0,04 Сернокислое железо 0,075 Цистеин 0/5 Лимонно-кис-дый натрий IfO

Хлористый калий 1, 5 Двузамещенный фосфат калия3,5 (рН 7,1) трижды пассируют клетки штамма Jersinia pestis 556/10 Rif 5 при 35С с пересевами через 48 ч. Формалинизированные эритроциты барана суспендируют в 0,85%-ном растворе NaCI с 0,5% D-маннозы (рН 7,2) до получения 5% взвеси. 0 На дно чашки Петри наносят 2 капли такой взвеси и в ней осторожным растиранием суспендируют 1 стандартную петлю диаметр 2 мм) культуры штамма 556/106. Учет реакции прово5 дят через 30-60 с при легком покачивании чашки Петри. Образуются крупные красные хлопья эритроцитов, взвесь светлеет, что характерно для присутствия пилей. Наличие пилей Q У исследуемой культуры подтверждается данными электронной микроскоПИИ. Для этого клетки указанного штамма с описанной среды наносят на сетку, покрытую углеродом, фиксируют 1%-ной фосфорно-вольфрамовой кислотой (рН 7,1-7,3) и исследуют . на микроскопе JBM - 100 Б при 60 кЗ. У гемагглютинирующкх клеток обнаруживается выявление густой сети тонких филаментов - пилей. Пример 2. На питательной среде содержащей, г/л:

Дрожжевой экстракт 10,0 Триптон-бакто10,0

Казаминовые кислоты 10,0 5 Сердечно-мозговой отвар 10,0 Агар-агар13,5

Глюкоза13,0

Сернокислый магний 0,06 Сернокислое железо 0,1 0 ЦистеинО,6

Лимонно-кислый натрий 1,2 Хлористый калий2,0

Двузамещенный фосфат калия4,О

2 РН 7,2 трижды пассируют клетки штамма Ipestis 556/10 Rif при 36С с интервалами Ьь ч. Опреде- ление пилей проводят.аналогично примеру 1.

П р и м е р 3. Ка питательной среде состава, г/л:

Дрожжевой экстракт12,0 Триптон-бакто12,0 Казаминовые кислоты12,0 Сердечно-мозговой отвар12,0 /Лгар-агар14,0 Глюкоза15,0 Сернокислый магний0,07

0 Сернокислое железо0,125

Цистеин0,75

Лимонно-кислый натрий1,4

Хлористый калий2 , 5 Дзузамещенный фосфат

5 калия4,5

(рН 7,3) 4 раза пассируют клетки штамма jjpestis 556/106 Rif при синтервалами в 36 ч. Определение пилей проводят аналогично примеру 1.

Использование предлагаемого изобретения позволяет определять новый фактор вирулентности - пили адгезии у чумного микроба. Распознание нового фактора вирулентности чумного микроба дает возможность дополнить существующую систему типирования и систему индикации, а также основываясь на серотипах пилей, сконструировать полиантигенные химические вакцины, куда пили адгезии будут входить в качестве составного компонента.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯПИЛЕЙ АДГЕЗИИ У МИКРОБОВ РОДА IERSIHIA путем пассирова ния микроорганизмов на питательных средах с последующей постановкой реакции агглютинации с эритроцитами в присутствии D-waHнозы и учетом результатов, о т л ичаю.щийся тем, что, с целью выявления пилей адгезии-детерминантов патогенности Jersinia pestis, пассирование проводят 3-4 раза .при 35-37 с через 36-48 ч на питательной среде, содержащей, г/л: Дрожжевой экстракт9-12 Триптон-бакто9-12 Казаминовые кислоты9-12 Сердечно-мозговой отвар 9-12. Глюкоза 10-15 Сернокислый магний 0,04-0,07 Сернокислое железо 0,075-0,125 Цистеин 0,5-0,75 С S Лимо н но-кислый натрий1,0-1,4 (Л Хлористый калий 1,5-2,5 Двузамещенный с: фосфат калия 3,5-4,5 Агар-агар13-14 Вода дистиллированнаяОстальное и рН среды7 1-7,3