Способ приготовления диагностикума для определения антигенов в реакции коагглютинации Советский патент 1992 года по МПК G01N33/531 

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при изготовлении диагностикумов для реакции коагглютинации.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Цель достигается тем, что перед сенсибилизацией фиксированные клетки стафилококка обрабатывают ультразвуком мощностью 100 Вт/см2 не более 1 мин, трижды отмывают в барбитуратном буферном растворе рН 8,6 и в таком же растворе проводят сенсибилизацию антителами.

П р и м е р 1. Для приготовления диагностикума 10% фиксированную суспензию стафилококка штамм COWAN 1 подвергают ультразвуковой обработке в течение 1 мин при 22 кГц и мощности 100 Вт/см2 при помощи ультразвукового дезинтегратора УЗДН-1. Микробные клетки трижды отмывают барбитуратным буферным раствором рН 8,6 и ресуспендируютдо 10% концентрации в том же растворе. Сенсибилизацию проводят добавляя 0,1 мл омнисыворотки (содержит антитела к капсульным полисахаридам пневмококка) к 1 мл 10% суспензии клеток , в барбитуратном буферном растворе рН 8,6.

Смесь инкубируют 1 час при при периодическом встряхивании. Затем микробные клетки отделяют центрифугированием и ресуспендируют в 1 мл барбитуратного буферного раствора. Контрольный диагно- стикум изготовлен тем же способом, используя для сенсибилизации нормальную кроличью сыворотку.

На предметное стекло помещают Две капли стерильного физраствора, в котором суспендируют бактериальный материал. Затем к исследуемому материалу добавляют равное количество заранее приготовленного коагглютинационного диагностикума: к

XI

О

ю

S3

N)

первой капле - диагностику на основе ом- нисыворотки, ко второй - контрольный ди- агностикум на основе неиммунной сыворотки кролика.

Активность реакции оценивали определением минимальной концентрации кап- сульного полисахарида пневмококка вызвавшей выраженную агглютинацию с образованием видимых невооруженным глазом хлопьев и просветлением реакционной смеси при отсутствии реакции с контрольным диагностикумом.

Установлено, что диагностикум реагирует с капсульным полисахаридом пневмококка в концентрации 0,03 мкг/мл. Диагностикум, приготовленный по способу- прототипу, реагирует с тем же антигеном в концентрации 0.48 мкг/мл.

П р и м е р 2. Коагглютинационный реагент для выявления микроорганизмов HAEMOPHILOS INFLUENZAE.

Приготовление реагентов проводят по предложенному методу (пример 1)с исполь- зованием сыворотки К.Н.INFLUENZAE.

В качестве тест-антигена был использован препарат микробных клеток гемофиль- ной палочки с известным содержанием полирибозилрибитолфосфата.

Диагностикум, приготовленный по описанной нами методике, реагирует с тест-антигеном в концентрации 0.12 мкг/мл.

П р и м е р 3. Коагглютинационный реагент для выявления микроорганизмов B.PERTUSSIS.

Реагент готовят по предложенному методу (пример 1) с использованием агглютинирующей коклюшной сыворотки.

Определение чувствительности диагно- стикума проводят описанным ранее методом, используя в качестве тест-антигена препарат микробных клеток В.PERTUSSIS с известным содержанием липополисахари- да. Липополисахарид B.PERTUSSIS опре- деляется в концентрации 39 мкг/мл.

Положительный эффект способа заключается в том, что чувствительность повышается в 16 раз.

Данный способ может быть использо- ван для изготовления коагглютинационных диагностикумов для выявления и других видов микроорганизмов.

20

Формула изобретения

Способ приготовления диагностикума для определения антигенов в реакции коаг- глютинации, включающий синсибилизацию фиксированных клеток золотистого стафилококка штамма Cowan 1 препаратом антител, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, перед сенсибилизацией фиксированные клетки стафилококка обрабатывают ультразвуком мощностью 100 Вт/см не более 1 мин. трижды отмывают в барбитуратном буферном растворе рН 8,6 и в таком же растворе проводят сенсибилизацию антителами.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных заболеваний. Целью изобретения является повышение чувствительности диагностикума. Суспензию клеток золотистого стафилококка штамма COWAN 1 после фиксации фор- малином подвергают обработке ультразвуком мощностью 100 Вт/см2 не более 1 мин, отмывают их барбитурэтным буферным раствором рН 8.6 и в нем не проводят сенсибилизацию антителами. Интенсивность реакции коагглютинации оценивают общепринятым методом (ча четырех- крестной системе) при отсутствии реакции с контрольным реагентом. Изобретение позволяет повысить чувствительность диагностикума в 16 раз.