Питательная среда для культивирования молочно-кислых бактерий Советский патент 1984 года по МПК C12N1/20 C12G1/02 

оо to

СХ)

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается приготовления питательной среды для культивирования молочно-кислых бак тёрйй, которая находит применение в винодельческой промьшоленности.

Известна питательная среда для культивирования молочно-кислых бактерий, состоящая из виноградного сусла (.носителя биологически активных веществ ), разбавлен-ного водой до содержания сахароз 5%, 1% дрожжевого автолизата и щелочи до достижения рН равного 5-6 fl.

Наиболее близкой к предлагаемой является питательная среда для культивирования молочно-кислых бактерий, включающая клюкозу, дрожжевой экстракт, биологически активные вещества и основу среды 2.

Недостатками известных питательных сред являются наличие достаточно высоких концентраций солей винной кислоты ингибирующей рост молочно-кислых бактерий, высокая стоимость питательной среды и низкая концентрация молочно-кислых бактерий.

Цель изобретения - повышение выхода биомассы и снижение себестоимости целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для культивирования молочнокислых бактерий, включающая глюкозу, дрожжевой экстракт, биологически активные вещества и основу, в качестве биологически активных веществ и основы среды содержит барду коньячную с нейтрализованной винной кислотой и кормовой препарат витамина В (КМБ-12 при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Глюкоза0,2-0,5

Дрожжевой экстракт 0,1-0,2

Кормовой препарат

витамина В

0,2-0,3

12

Барда коньячная с нейтрализованной

99-99,5 винной кислотой

Предлагаемая питательная среда предназначена для культивирования молочно-кислых бактерий, применяемых в виноделии для биологического кислотопонижения столовых виноматериалов и вин. Сущность процесса кислотопонижения заключается в разложении бактериями двухосновной яблочной кислоты до одноосновной молочной. Использование коньячной барды для приготовления питательной среды позволяет путем использования бактериями биологически активных веществ коньячной барды уменьшить количесво вносимого дрожжевого экстракта или автолизата, что значительно снижает себестоимость питательной среды. Коньячная барда по составу максимально близка к вину, что способствует быстрой адаптации бактерий при их внесении в вино после культивирования на указанной среде. Характерной особенностью, отличающей молочно-кислые бактерии, используемые в виноделии, .от других групп молочно-кислых бактерий, является способность разлагать яблочную кислоту. В связи с этим после культиви0 рования на указанной питательной среде конститутивный или адаптивный характер фермента не оказывает влияния на скорость сбраживания яблочной кислоты. Все эти преимущества позво5 ляют считать предлагаемую питательную среду наиболее перспективной для использования в промышленном масштабе.

Добавление в питательную среду

Q препарата КМБ-12, являющегося источником витамина также пуриновых и пиримидиковых оснований, оказывает стимулирующее влияние на размножение молочно-кислых бактерий. Внесение одинаковых концентраций дрожжевого экстракта и КМБ-12 оказывает одинаковое стимулирующее действие .

При совместном внесении в питательную среду дрожжевого экстракта

и КМБ-12 выход биомассы увеличивается в 2 раза. .

В таблице представлены результаты культивирования штамма Zeuconostoc ОК-43-7 на известной и предлагаемой

5 питательных средах. После культивирования в течение 72 ч на среде-прототипе максимальная биомасса молочнокислых бактерий составляет 200 млн/мл, а на предлагаемой питательной среде0 570 млн/мл.

При использовании в качестве прототипа питательной среды, содержащей г/л: пептон 10J дрожжевой экстракт 5,

5 MnSO 0,05; К ,2, глюкоза 10; томатный сок 250, на 1000 л затрачивают 1485-1624 руб.

Предлагаемая питательная среда

Q предназначена для промышленного получения биомассы молочно-кислых бактерий с целью их дальнейшей лиофилизации. Проведено культивирование 61 штамма из рода Zenconostoc длят отбора штаммов, обеспечивающих максимальный выход биомассы. Эти штаммы исследовались также на способность сбраживания яблочной кислоты. По этим двум критериям отобрано 5 штаммов: 101-11-1, ОК-43-3, ОК-43-7,

0 ОК-43-2, А-2-4. Указанные штаммы обеспечивают накопление биомассы в концентрации 500-570 млн/мл. Штамм ОК-43-7 обеспечивает накопление биомассы 570 млн/мл и обладает более

5 высокой ферментативной активностью.

Приме pi. Приготовление питательной среды для культивирования молочно-кислых бактерий с использованием коньячной барды в качестве носителя биологически активных ве-. ществ начинается с нейтрализации винной йислоты.

Барду с титруемой кислотностью 11,5°/оо; РН 3,0 обрабатывают углекислым кальцием ICaCO). Титруейая кислотность снижается до 6,5 °/оо и рН повышается до 3,8. При определении органических кислот методом хроматографии на бумаге винная кислота не обнаружена.

Компоненты питательной среды смешивают при следующем соотношении, мас.%: коньячная барда 99,0} глюкоза 0,5; дрожжевой экстракт 0,2; КМБ-12 0,3. В среду вводят 5%-ную суспензию молочно-кислых бактерий штамма Zeuconostoc ОК-43-7 и проводят культивирование при 28 св течение 3 сут. Концентрация бактерий после культивирования 570 млн./мл.

П р и м е р 2. Барду с титруемой кислотностью 11,5°/00 и рН 3,0 обраh-батывают углекислым кальцием (CaCOj , Титруемая кислотность снижается до 6,5/00 , а рН повышается до 3,8. При определении органических кислот методом хроматографии на бумаге винная кислота не обнарул ена.

В дальнейшем компоненты питательной среды смешивают йри соотношении, мас.%: коньячная барда 99,5; глюкоза 0,2; дрожжевой экстракт 0,1;

КМБ-12 0,2. В среду вводят 5%-ную суспензию кисломолочных бактерий штамма ОК-43-7 и проводят культивирование при 28°С в течение 3 сут; Концентрация бактерий после культивирования 270 млн/мл.

Предлагаемая среда обеспечивает увеличение выхода биомассы кисломолочных бактерий и снижение себестоимости целевого продукта.

Экономический эффект от использования предлагаемой питательной среды составляет 1033 руб. 46 коп. 1171 руб. 86 коп. на 1000 л, в зависимости от количества используемьлх компонентов.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МОЛОЧНО-КИСЛЫХ БАКТЕРИЙ включающая глюкозу, дрожжевой экстракт, биологически активные вещества и основу, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода биомассы и снижения себестоимости целевого продукта, в качестве биологически активных веществ и основы среды она содержит барду коньячную с нейтрализованной винной кислотой и кормовой препарат витамина при следующем соотношении ингредиентов, мас.%: Глюкоза 0,2-0,5 Дрожжевой экстракт 0,1-0,2 Кормовой препарат витамина ,2-0,3 Барда коньячная с S нейтрализованной винной кислотой99-99,5 (Л