Способ определения дигидротестостерона и его производных в масляной смеси Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

00 со I Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам количественно1о определения стероидных соединений, применя мых в практике здравоохранения. Известен весовой способ количес венного определения стероидных сое динений, содержащих карбонильную группу, с помощью 2,А-динитрофенил гидразина f JИзвестен также способ, позволяю щий проводить разделение и определ ние смеси 17-кетостероидов на осно ве реакции с 2,4-динитрофенилгидра зином t2 3. Указанный способ неприменим для проведения анализа масляных растворов без предварительного отделения масла, в присутствии которого возможно неполное разрушение избытка реактива, мешающего определению 3-кетостероидов в виде их 2,4-динит рофенилгидразонов. Цель изобретения - упрощение спо соба количественного определения дигидротестостерона и его производных из маслянистых растворов без предварительного отделения масла. Указанная цель достигается тем, что в способе определения дигидротестостерона и его производных в масляной смеси путем добавления 2,4-динитрофёнилгидразина с последующей хроматографией образца в тонком слое сорбента и фотометрией пробу нагревают при 90-1ОО С в тече ние 1,5-2 ч в присутствии 1,8-2N соляной кислоты. . Способ осуществляют следующим об разом, Исследуемый масляный раствор дигидротестостерона и его производных помещают в пробирку, приливают 15-мл О,15%-ного раствора 2,4-динитрофенш гвдразина в 1,8-2N соляной кислоте и нагревают при 90-100°С в течение ч. После охлаждения осадок отфильтровывают через стеклянный фильтр, промьшают 5 мл 0,5 N соляной кислоты и водой. Затем осадок растворяют на фильтре в минимальном коли честве органического растворителя, например метиловом спирте и хлороформе. Раствор переводят в склянку вместимостью 20 мл и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1,00 МП хлороформа и пробы раствора, содержащие в сумме 200-300 мкг смеси анализируемых 3-кетостероидов, t6 наносят на хроматографические пластинки Силуфол. XpoмaтoгpaфиpyJaт восходящим методом, используя в качестве подвижной фазы хлористый метилен; при необходимости для лзлчшего разделения компонентов смеси хроматографирование проводят дважды. Пятна разделенных на хроматограмме 2,4-динитрофенйлгидразонов, 2о -метилдигидротестостерона, 2-метилдигидротестостерона пропионата и 2о6-метипдигидротестостерона капроната вьфезают, элюируют их 10 мл органического растворителя, например смесью метилового спирта и хлороформа (7:3). Количество анализируемого 3-кетостероида определяют фотометрически при длине волны 366 км. Оптимальный интервал концентрации определяемого 3-кетостероида в фотометрируемом растворе 10-15 мкг мл. Расчет количества анализируемого 3-кетостероида ведется методом сравнения со стандартным масляным раствором смеси тех же 3-кетостероидов, концентрация которых близка к концентрации исследуемой смеси, после проведения операций, которым подвергается исследуемый раствор. Расчет количественного содержания дигидротестостерона и его производных в масляном растворе ведут по формуле Рк-а содержание определяемого 3-кетостероида в 1 мл исследуемого масляного раствора, мг; оптическая плотность иссле;| уемого раствора; оптическая плотность стандартного раствора; а - содержание определяемого 3-кетостероида в 1 мл стандартного масляного раствора смеси 3-кетостероидов , мг. Пример 1.0,03 мл масляного аствора, содержащего в сумме 10 мг о метш1дигкдротестостерона, 2о(.-метилигидротестостерона пропионата и о --тУ етнпдигидротестостерона капроната одвергают определению по описанному пособу. Исследованная смесь содержит 3,33 мг/мл 2о(.-метилдигидротестотерона, 48,17 мг/мя 2а(гметилдигидротестостерона пропионата и 273,4мг/м 2о1- тилдигидротестостерона капроната: определено соответственно, мг/мл: 23,12; 48,50; 275,6.

Пример 2. 0,04 мл масляного раствора, содержащего в сумме 10 мл дигидротестостерона, дигидротестостерона пропионата и 2о6-метилдигидротестостерона энантата, помещают в пробирку и подвергают тем же операциям, что и в примере 1.

Исследованная смесь содержит 0,997 мг/мл дигидротестостерона, 4,003 мг/мл дигидротестостерона проИпИоната и 238,4 мг/мл 2с/-метилдигидротестостерона энантата: определено соответственно, мг/мл: 0,972; 4,090; 234,6.

Таким образом, предлагаемый способ ,1Л)зволяёт вести определение 3-кетостероидов непосредственно из масляного раствора, что значительно , экономит время, необходимое на проведение анализа, и уменьшает количество операций за счет того, что отпа, дает необходимость разрушать избыток реактива.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИГВДРОТЕСТОСТЕРОНА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ В МАСЛЯНОЙ СМЕСИ путем добавления 2,4-динитрофенш1Гидразина с последующей хроматографией образца в тонком слое сорбента и фотометрией, отличающийс я тем, что, с целью упрощения, пробу нагревают при 90-100°С в течение 1,5-2 ч в присутствии 1,8-2N соляной кислоты.