Способ получения производных 7- @ 2-(2-аминотиазолил)-2-оксииминоацетамидо @ -3-цефем-4-карбоновых кислот или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1984 года по МПК C07D501/20 A61K31/546 

Изобретение относится к способу получения новых антибиотиков цефало споринового ряда, которые могут най применение в качестве антимикробных веществ в медицине. Известен способ получения биолог чески активных производных (2-аминотиазолил)-2-оксииминоацетамид -2-низший алкил-З-цефем-4-карбоново КИСЛО7Ы ацилированием соответствующего 7-аминоцефалоспорина с защищен ной в виде сложного эфира карбоксигруппой 2-(2-аминотиазолил)-2-оксииминоуксусной кислотой или ее реакционноспособным производным с после дующим переводом сложноэфирной груп пы в карбоксильную группу и вьщелен ем целевого продукта в виде свободной кислоты или ее солиП J. Цель изобретения - получение новых антибиотиков цефалоспоринового ряда, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм. Цель достигается способом получе ния производных 7-С2-(2-аминотиазолил)-2- oкcииминoaцeтaмидo -3-цeфeм-4-кapбoнoвыx кислот формулы Т S N-rrC-CONH Л RilJH 5 в форме син-изомеров, когда R.,- водород или группа, защищающая аминогруппу, такая как формил, водород, С -Сд-алкил, метил замещенный карбоксилом или этоксикарбонилом, этил, замещенный 1-3 атомами гал гена, Cj-алкенил, С -алкинил ИЛИCg-Cj-циклоалкил, или в форме анти-изомеров когда. R группа, защищающая аминогруппу, такая как формил, метил, или их фармацевтически приемлемых со лей, таких как соль щелочного металла, соль щелочноземельного металла, соль аргинина или соль лизина, заклю чающимся в том, что в соединении формулы ГТ TJ-jpC-CONH-r-f -j RiNH s COOR, где RX и R, vj имеют указанные значения, группа, защищающая карбоксигруппу,. такая как п-нитробензил, удаляют группу, защищающую карбокси.группу, щелочным гидролизом, гидрированием или обработкой ферментом, таким как эстераза, и вьщеляют целевой продукт в виде свободной кислоты или ее сложного эфира или ее фармацевтически приемлемой соли. Частичная структура формулы М -я СG-COД J п K.IJ/S используется для обозначения обоих геометрических изомеров: If-Vc-cq1«-0-R2 S -с-соИКда S R2-0--K ГА) Геометрия формулы (S) обозначается как син, а геометрия формулы (А) ак анти. Исходя из соотношения структурной ктивности необходимо отметить, что ин-изомер соединения формулы Т, ак антимикробнь й агент имеет тененцию к значительно большей активости, по сравнению с соответствуншщм нтиизомером с точки зрения профилакической и терапевтической ценности. Тиазолилгруппа, характеризуемая астичной формулой Ril5H аходится в таутомерноМ равновесии тиазолинилгруппой формулы V C -Cg-алкил может представлять coой остаток линейного или разветвленого алкана, содержащего 1-8 атомов глерода, такой как метКл, этил, про, изопропил, бутил, изобутил. ретбутил, пентил, неопентил, гексил, гептил или октил, предпочтитель но алкил, содержащий 1-4 атомов углерода. Сэ-алкенил может представлять соб остаток линейного или разветвленного алкена, такой как аллил, 1-пропенил или изопропенил. Cj-алкинил может представлять собой остаток алкина, такого как пропаргил или 1-пропинил, С5 С -циклоалкил может представля собой циклопентил или циклогексил, предпочтительно циклогексил. Предпочтительными примерами этила замещенного 1-3 атомами галогена, мо гут быть 2-хлорэтил, 1,2-дихлЬрэтил или 2,2,2,-трифторэтил и т.д. Эстераза, которая должна быть при менена при проведении энзиматическог гидролиза, может быть использована не только в очищенном состоянии, но также и в виде материала-сырца. В качестве микроорганизмов, обладающих эстеразной активностью, можно назвать микроорганизмы, принадлежащие к виду Bacillus, Corynebacterium Micrococcus, Flavovacterium, Salmone la, Staphylococcus, Vibrio, Microbac terium, Escherichia, Arthrobacter, Azotobacter, Alcaligens, Rhizobium, Brevibacterium, Kluyvera, Proteus, Sarcina, Pseudomonas, Xanthomonas, Protaminobacter, Comamonus, и им подобные микроорганизмы. Примерами указанных микроорганиз- мов являются: Bacellus, Sibtilis IAM-1069, IAM-1107, IAM-1214, Bacillus sphacricus IAM-1286, Corynebacte rium egui IAM-1308, Micrococcus varians IAM-1314, Flavobacterium rigens IAM-1238, Salmonella typhimirium IAM-1406, Staphylococcus epibetraidis IAM-1296, Microbacterium flavum IAM-1642, Alcaligens faecalis ATCC-8750, Arthrobacter Simplex ATCC-6946, Azotobacter vinelandii lAM-1078, Escherichia coli IAM-1101 Rhizobium japonicum IAM-0001, Vibrio metchnickovii IAM-1039, Brevibacterium helvolum IAM-1637, Protominobacter Alboflavum IAM-1040, Comamonas terrigena IFO-12685, Syrcina lutea IAM-1099, Pseudomonas schuylki liensis IAM-1055, Xanthomonas trifol ATCC-12287 и им подобные микроорганизмы. При проведении энзиматического гид ролиза эстераза может быть предпочти тельно использована в форме культивированной среды. В качестве культурной среды, могут быть применены питательные среды, включакнцие источники усваиваемого углерода и азота, и неорганические соли К предпочитаемым источникам углеро да относятся, например, глюкоза, сукроза, лактоза, сахары, глицерин и крахмал. К предпочитаемым источникам азота относятся, например, мясной экстракт пептон, клейковидная мука, пшеничная мука, хлопковая мука (из семян), соевая мука, жидкость полученная в результате настоя пшеницы, дрожжевой экстракт, гидролизат казеина и аминокислота, а также неорганический) и органический азот, в виде солей аммония (т.е. например, сульфата аммония, нитрата аммония, фосфата аммония и т.д.), нитрата натрия и им подобных соединений. В случае необходимости минеральные соли, такие как карбонат кальция, фосфат натрия или фосфат калия, соли магния и соли меди и различные витамины, также могут быть использованы. Необходимая величина водородного показателя рН культурной среды, температура культивирования и время изме няются в зависимости от вида микроорганизма, который предполагается использовать. Требуемая величина водородного показателя обычно находится в диапазойе 5-8 рН, температура примерно 20 - 35°С, время культивирования 20-120 ч. Полученная таким образом культивированная .среда сама по себе и произведенный ее материал могут быть использованы для проведения ферментного гидролиза в соответствии с данным способом. Под произведенным культивированной средой материалом подразумевается любой продукт, характеризуемый эстеразной активностью и ПРОИЗВОДИК&1Й с помощью средств для увеличения указанной эстеразной активности. Ферментный гидролиз проводится путем контактирования соединения формулы 1 1 с культивированной средой микроорганизмов или ими произведенным материалом, в водной среде, такой как вода или буферный раствор (например фосфатный буферный раствор, предпочтительно в присутствии поверхностноактивного агента. Таким образом, эта реакция обычно проводится путем добавления соединения формулы 11 в культивированную среду микроорганизмов или в ими прои веденный материал, находящийся в жид ком состоянии, например в верхний слой, фильтрат или энзимный раствор, либо Б раствор или суспензию культивированной среды или произведенного ею материала в водной среде. В некоторых случаях оказывается предпочтительным производить перемешивание ползгченной таким образом реакционной среды. Предпочитаемая величина водородно го показателя рН реакционной смеси, концентрация субстратов, время реакции и температура могут изменяться в зависимости от характеристик культивированной среды или произведенног ею материала, или от используемого соединения формулы П.Однако реакцио ные условия предпочтительно должны выбираться такими, чтобы величина во дородного показателя находилась в диапазоне 4-10 рН при 20-50°С, более предпочтительно, чтобы величина водо родного показателя находилась в диапазоне 6-8 рН при 25-35°С и в течение 1-100 ч. Концентрация исходного соединения формулы 11, которая должно быть использовано в качестве субстрата в этой реакционной смеси, может находиться в диапазоне 0,1-100 мг на 1 мл, более предпочтительно 1-20 мг на 1 МП. Ниже представлены следующие данные испытаний некоторых .представительных соединений формулы Т. Противобактериальная активность invitro. Определяют с помощью метода, заключающегося в применении 2-кратного разжижения пластинки агара. Одну порцию,100-кратного разбавленного раствора выращенной в течение нрчи культуры каждого из штаммов, подверженньпс. исследованию в соевой среде Tryptlease, наносят в виде полосы в центральную часть настоя агара, содержащего определенную концентрацию соединения, подвергаемого испытанию, и далее вьщерживают в инкубационных условиях при 37°С в течение 20 ч. Исследуемые соединения: (2-амино-4-тиазолил)-2-метокси иминoaцeтaмидoj-3-цeфeм-4-кapбoнoвaя кислота (сиЯ-изомер), (2-амино-4-тиазолил)-2-этоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоноваякислота (син-изомер), (2-амино-4-тиазолш1)-2-п-пропоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). Результаты испытаний представлены в табл.1. Таблица 1

Способ получения производных 7-.2-

Определение защитного эффекта против экспериментально вызванной инфекцни у мышей.

Самцов мьшей вида ICR в возрасте 4 недели, каждый весом 18,5-21,5 г

разбивают на группы по 100 мьшгей. Испытуемые бактерии, выращенные в течение ночи на соевом krape (Trypti.case) при 37 С, суспендируют в 5% муцине для получения суспензии. соответствующее каждой исследуемой клетке. Мышам парентерально (внутрибрюшинно) вводят 0,5 мл суспензии. Раствор, содержащий каждое исследуемое соединение, вводят мьппам подкожно в различных дозировках, спус тя 1 ч после заражения их указанной суспензией. Величины ЕДсррассчитаны исходя из количества выживших мьппей для кажКультура, вьфащенная в течение ночи.

100-кратное разбавление культуры, выращенной в течение ночи.

Обработка двумя раздельными дозами спустя 1 и 3 ч после заражения. Определение острой токсичности. Десять самцов крыс и десять самок крыс в возрасте 6 недель (вида JCh-SD) разбивают на группы. Исследуемое соединение подвергают растворе нию в дистиллированной воде и вводят животным подкожно и внутривенно. Животных наблюдают спустя 7 дней. Летальная дозировка ЬВуд рассчитана исходя из количества мертвых животных в соответствии с методикой, разработанной Letchf ieT.d-WiIIoxq;p . Исследуемое соединение 7-{2-(2-ам но-4-тиазолил)-2-метоксииминоацетами10

Таблица 2 52is дои из доз соединения после четырех дней наблюдения. Исследуемое соединение: 1). 7-С2-(2-амино-4-тиазолил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер), 2) 7-С2-(2-амино-4-тиазоЬил)-2-мётоксииминоацетамидо -цефалоспорановая кислота (син-изомер). Результаты испытаний представлены в табл.2. доЗ-З-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). Результаты испытаний представлены в табл.3. Таблица 3 LD, мг/кг ол крысы Подкожно Внутривенно abaut 8000 8000 При профилактическом и/или терапевтическом применении активное соед нение формулы (1) используется в форме обычных фармацевтических препа ратов, которые содержат указанное соединение в виде активного инградие та, в смеси с формацевтически пригодными носителями, такими как органический или неорганический твердый или жядкий наполнитель, который явля ется пригодньи для орального, парентерального или наружного применения Фармацевтические формы могут быть тв дыми, например капсулы, таблетки, драже, мази, свечи, - или в жидкой форме, например раствор, суспензия, эмульсия. В случае необходимости в указанные фармацевтические формы могут быть включены добавки, стабилизаторы, увлажняющие или эмульгирующие агенты, наполнители и другие обы но используемые в таких случаях мате риалы . Дозировка соединений может изменяться и также зависит от возраста и состояния пациента, вида заболевания, его тяжести, от вида активного соединения формулы (1), которое должно быть применено и т.д., средня единичная дозировка 50, 100, 250 и 500 мг активного соединения формулы 1 является достаточной для лечения заболеваний, вызванных патогенными бактериями. В общем случае акти ное соединение формулы 1 может быть введено пациенту в диапазоне 1-100 м на кг живого веса, предпочтительно 5-50 мг/кг живого веса. П р и м е р 1. 1). К раствору 1.25 г син-изомера п-нитробензил (2-формамид-4-тиазолил)-2-м0т.оксииминоацетамидо -З-дефем-4-карбоксилата в 40 мл метанола и 50 мл тетрагидрофурана добавляют 0,65 г 10% палладия на угле и смесь каталитически гидрируют при комнатной температуре и атмосферном давлении 3,5 ч. После отделения катализатора фильтрат выпаривают в вакууме, к остатку добавляют 80 мл воды и рН смеси доводят до 7,5 раствором бикарбоната натрия, затем нерастворимые отфильтровывают . Фильтрат промывают 50 мл этилацетата и в раствор добавляют 100 мл этилацетата. После доведения рН до 1,5 10%-ной соляной кислоты этилацетатньй слой отделяют. Оставшийся водный слой два раза экстрагируют 80 мл этилацетата, экстракты соединяют с этилацетатным слоем, промывают водным раствором хлорида натрия, сушат сульфатом магния, выпаривают в вакууме и получают 0,60 г - син-изомера (2-формамид-4-тиазолил;-;г-метоксииминоацетамидоЦ-З-цефем-А-карбоновой кислоты с т.шт. 176-183 С (разлож.). ИК 3250, 1780, 1690, 1660, 1550 см ЯМР - f ч/млн ( -Дб):3,63 (2H,d,;7 4 Гц), 3,93 (ЗН,5), 5,10(1Н, сЗ, а 5 Гц), 5,90 (1Н, я, , J 5,8 Гц), 6,53 (1Н, i , Гц), 7,47 (1Н, 5 ), 8,57 (1Н, S ), 9,70 (Ш, сЗ, J 8 Гц), 12,63 (1Н 5 ). о 2).1,1 г син-изомера п-нитробензил 7-С2-(2-формамид-1-тиазолил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата суспендируют в смеси 10 мл этанола и 15 мл воды. К суспензии при по каплям добавляют в течение 10 мин 6 мл 1 н. водного раствора едкого калия и перемешивают 10 мин. Полученньй раствор подкисляют до рН 7,5 соляной кислотой, промывают этилацетатом, рН доводят до 2,5 10%-ной соляной кислотой, выпавшие кристаллы отфильтровывают и получают смесь 0,32 г син-изомера (2-формамидо-4-тиазолил) -2-метоксии1«1ноацетамидо -3-цефем-4-карбоновой кислоты и 0,035 г син-изомера (2-амино-4-тиазолил)-2-метоксийминоацетамидо1-3-цефем-4 карбоновой кислоты. 3). 7.& г син-изомера п-нитробензил 7-(;2(2-амино-4-тиазолил-2-меток сииминоацетамид оЗ-З-цефем-4-карбоксиата суспендируют в смеси 60 мл этанола и 60 МП воды. К перемешиваемой суспензии по каплям при перемешивании и охлаждении льдом добавляют в течение 10 мин 1 н. водный раствор дкого калия ( мл) и перемешивают ще 15 мин при . рН полученного аствора доводят до 7 концентрированой соляной кислотой, промывают тилацетатом и выпаривают до половиы объема в вакууме. рН концентрированого раствора доводят до 5,0 и хромаографируют на колонке с 80 мл макроористой неионной смолой Диайон НР-20 (изготовлена Митсубиси Кемикал Индастриз Лмтд), элюируют 5%-ным водным раствором изопропилового спирта. Фра ции, еодержаш,ие целевой продукт, собирают и доводят рН до 3,2 10%-ной соляной кислотой. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, сушат и получают 2,3 г син-изомера 7-f2-(2-амино-4-тиазолш1)-2-метоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбоновойкислоты. 4) 1 ,0 г палладия на угле, смоченном водой (3 мл), добавляют к раствору 2,3 г син-изомера 4-нитробе зил (2-амино-4-тиазолил-2-этоксинминоацетамидоЭ-З-цефем-4-карбоксилата в смеси 30 мл тетрагид рофурана, 15 мл метанола и 0,3 мл уксусной кислоты. Суспензию каталитически восстанавливают при комнатной температуре при атмосферном дав лении 2 ч. После удаления катализатора фильтрованием фильтрат выпаривают в вакууме, к остатку добавл ют этилацетат и рН раствора доводят до 7,5 водным раствором бикарбоната натр Отфильтровывают нерастворимые, водный раствор отделяют, промьшают эти ацетатом, рН доводят до 5,5 г и обрабатывают активированным углем. рН водного : раствора доводят до 3,2 г и осадок отфильтровывают, сушат и получают 0,6 г син-изомера 7-Г2-(2 амино-4-тиазолил)-2-этоксииминоацетамидо)-3-цефем-4-карбоново кислоты. ИК-9 1 $ с. 3500 3300, 3200, 1785, 1625, 1600 см:. ЯМР -с СДМСО -д,ч/млн) : 1,20 о(ЗН, -t , 3 7 Гц), 3,57 (2Н, m ), 4,08 (2Н, с ,3 7 Гц), 5,08 (1Н, d , 3 5 Гц), 5,83 (1Н,сЗа , 3 5 Гц и 8. Гц), 6,47 (1Н, т ), 6,73 (1Н, 5 ), 7,20 (2Н,т), 9,58 (1Н,d , 3 8 Гц). . 5). 1 МП уксусной кислоты и суспензию 2 г 10% палладия на угле в 8 мл воды добавляют к раствору .5,0 син-изомера 4-нитро-бензил (2-амино-4-тиазолил)-2 -изопропоксиими ацетамидо3-3-цефем-4-карбоксилата в 150 мл тетрагидрофурана и суспензию каталитически восстанавливают п комнатной температуре и атмосферном давлении. После отделения катализатора- фильтрат выпаривают в вакууме. К остатку добавляют 80 мл этилацетата, рН доводят до 7,5 раствором бикарбоната натрия. Органический слой отделяют и экстрагируют, водным раствором бикарбоната натрия. Экстракт и водньй слой соединяют, рН доводят до 3 концентрированной соляной кислотой и экстрагируют тетрагидрофураном. Экстракт промывают насыщенным раствором хлйркда натрия, сушат сульфатом магния, вьшаривают в вакууме. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, сушат и получают 0,8 г син-изомера 7-{.2-(2-амино-4-тиазолил)-2-изопропоксииминоацетамйдоЗ-З-цефем-4-карбоновой кислоты. т:: : 3320, 1780, 1670, 1635 см . ЯМР - о ч/млн (ДМСО-д,): 1,20 (6Н, d , :) 6 Гц), 3,55 (, № ),1 4,30 (1Н, CV , J 6 Гц), 5,08 TlHTi J 5 Гц), 5,82 (1H,dd , 5 Гц . , ,,.,„, и 8 Гц), 6,45 (1Н, m ), 6,68 (1Н, 5 ); 7,10 (2Н,т), 10,08 (1Н, ,с1 , D 8 Гц) . 6). 5,0 г син-изомера 4-нитробензил 7-Г2-(2-амино-4-тиазолил)-2-пропоксииьданоацетамь1До}-3-цефем-4-карбоксилата обрабатывают как в примере .1 (5) и получают 0,9 г син-изомера (2-амино-4-тиазолил-2-пропоксииминоацётамидрЗ-3-цефем-4-карбоноврйкислоты. : 3250, 1770, 1650, 1660, 1620 см-1. ЯМР сА ч/млн (ДМСО-Де): 0,93 (ЗН, , J 7 Гц), 1,67 (2Н, секстет, :) 7 Гц), 3,60, (2Н, m ), 4,03 (2Н,Ч , 3 7 Гц), 5,13 (1Н, J , 3 5Гц), 5,83 (1н, cJd, ::Г 5 Гц и 8 Гц), 6,48 (2Н, . , 3 4 Гц), 6,70 (1Н, 5 ), 7,18 (2Н, тт ),9,53 , (1Н, , Л 8 Гц). 7). Смесь 34,5 г син-изомера 4-нитробензил (2-формамидотиазол-4-ил)-2-бутоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоксилата, 345 мл тетрагидрофурана, 14 г 10 палладия на угле, 140 мл метанола, 2,5 мл уксусной кислоты и 50 мл воды каталитически восстанавливают при атмосферном давлении и комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь фильтруют и промывают т трагндрофураном. Фильтрат выпаривают в вакууме, остаток растворяют в смеси.этилацетата и раствора бикарбоната натрия. Нерастворимые отфильтровывают, этилацетатный слой отделяют и экстрагируют водным раствором бикарбоната натрия. Водный слой и водный экстракт соединяют. Водный раствор промывают этилацетйтом и диэтиловым спирэфиром, рН раст вора доводят до 2,0-10%-ной соляной кислотой и перемешивают 30 мин. Осадак отфильтровывают, промьшают водой сушат сульфатом магния и получают 18,3 г син-изомера 7-|2-(2-формамидтиазол-4-ил)-2-бутоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК 3330, 3040, 1780. 1725 1695, 1655 см. ЯМР сА (ДМСр - д,, ч/млн): 0,90 (ЗН, t, I 7 Гц); 1,1-1,9 (4Н, т); 3,58 (2Н, d, I 5 Гц); 4,12 (2Н, t, Гц); 5,63 (1Н, d, Гц); 5.86(1Н, dd, I 7 5 Гц и 8 Гц); 6,46 1Н, t, I 4 Гц); 7,40 (1Н, S) 8,50 (1Н, .S); 9,63 (1Н, d, I 8 Гц) 12,57 (1Н, широкий S). 8). 14,2 г син-изомера 4-нитробензил 7-С2-(2-формамидтиазол-4-ил)-2- изобутоксииминоацетамидо -3-цефем -4-карбоксш1ата, 5,7 г 10% палладия на угле, 57 мл метанола, 142 мл тетрагидрофурана, 1 мл уксусной кислоты и 10 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 4,25 г син-изомера (2-формамидотиазол-4-Ш1)-2-изобутрксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК 3260, 1790, 1725, 1670 см--. ЯМР - сЛ (ДМСО - д): 0,92 (6СН, d, I 6 Гц); 1,6-2,3 (1Н, т); 3,61 (2Н, d, I 4 Гц); 3,91 (2Н, d, I 6 Гц); 5,14 (1Н, d, I 5 Гц); 5,88 (1Н, dd, I 5 Гц и 8 Гц); 6,50 (1Н, t, I 5 Гц); 7,40 (1Н, S); 8,56 (1Н, S); 9,64 (1Н, d, 1 8 Гц). 9). 2,0 г син-изомера 4-нитробензил (2-формамидотиазол-4-нл)-2 -циклогексилоксинминоацетамидЪ -3-цефем-4-карбоксШ1ата, 0,8 г 10% палладия на угле, 8 мл метанола, 20 мл тетрагндрофурана, 0,14 мл ук|сусной кислоты и 1,4 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 0,77 г син-изомера 7-t2-(2-фopмамидотиазол-4-ил)-2-циклогексш1оксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновойкислоты. ИК 3275, 3070, 1780, 1675 см-. ЯМР - (И (ДМСО - Р4, ч /млн) :; 0,82,2 (ЮН, м); 3,62 (2Н, широкий S); 4,12 (Ш, ш); 5,13 (1Н, d, 1 5Гц); 5.87(1Н, dd, I 9 Гц и 5 Гц); 6,47 (1Н, широкий S); 7,37 (1Н, S); 8,50 (1Н, S); 9,58 (1Н, d, I 9 Гц); 12,61 (1Н, широкий S). 10). Суспензию 4., 2 г антиизомера 4-нитробензнп 7-С2-(2-формамидтиазол-4-йл)-2-метоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карб рксилата, 1,7 г 10% палладия на угле, 0,63 мл уксусной кислоты, 6,3 мл воды, 42 мл метанола и 84 мл тетрагидрофурана каталитически восстанавливают в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 2 ч. После удаления катализатора фильтрованием фильтрат вьшаривают до объема около 15 мл. в вакууме. К концентрированному раствору добавляют 30 мл воды и 50 мл этилацетата, рН раствора доводят до 8,0 биакарбонатом натрия при перемешивании. Нерастврримые отфильтровывают, водный слой отделяют и промывают 50 мл зтил ацетата. Раствор обрабатывают акти- -. вированным углем, рН доводят до 2,2 10%-ной соляной кислотой при охлаждении льдом. Осадок отфильтровывают, промывают водой и получают 2,52 г антиизомера (2-формамидтиаз,ол-4-Ш1) -2-метоксииминоацетамидо 1-3-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК 3300 (широкий) 1780, 1630, 1670, 1550 см. ЯМР (ДМСО - Д, ч/млн): 3,63 (2Н, широкий S); 4,09 (ЗН, S); 5,15 (1Н, d, I 5 Гц); 5,87. (1Н, dd, I 5 Гц и 8 Гц); 6,55.(1Н, t, I 4 Гц); 8,09 (1Н, S); 8,52 (Ш, S); 9,46 (1Н, d, I 8 Гц). 11) 8 г син-изомера 4-нитробензил (2-формамидотиазол-4-ил)-2-пентилоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата, 3,6 г 10% палладия на угле, 36 мл метанола, 90 мл тетрагидрофурана, 0,63 г уксусной кислоты и 6,3 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 3,4 г син-изомера (2-формамидотиазолг4-ил) -2-пентилоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбон«вой кислоты. ИК 3275, 3075, 1795, 1700, 1660, 1630 см-г ЯМР -еЛ (ДМСО - д,, ч/млн): 0,62,0 (9Н, т); 3,60 (2Н, d, 1 4 Гц; 4,12 (2Н, t, I 6 Гц); 5,14 (1Н, d, I 5 Гц); 5,87 (Ш, dd, I . , 5,9Гц);6,49(1н, t, I 3 Гц); 7,40 (1Н, S); 8,53 (1Н, S); 9,64 (1Н, d, Гц); 12,68 (1Н, §). 12). 2,52 г син-изомера 4-нитробензил 7-12-(2-формамидтиазол-4-ил) 2-этоксикарбонилметоксииминоацетамид 1-3-цефем-4-карбоксилата, 1 ,-3 г 10% палладия на угле, 13 мл этанола, 25 мл тетраг-идрофурана, 0,22 мл уксусной кислоты и 2,2 мл воды обрабатывают по примеру 1 (7) и получают 0,4 г син-изомера 7-Г2-(2-формамидотиазол-4-ил)-2-этоксйкарбонилметоксииминоацетамидоЗ 3-цефем-4-карбонсвой кислоты.

ИК 3250, 3060, 1780, 1750, 1690, 1600 смЧ

ЯМР -«(ДМСО - д., ч/млн): 1,23 (ЗН, t, I 7 Гц); 3,61 (2Н, широкий S); 4,15 (2Н, q, I 7 Гц); А,73 (2Н, S); 5,13 (1Н, d, I 5 Гц); 5,87 (Ш, dd, I 5 Гц и 9 Гц); 6,48 (1Н, широкий S); 7,43 (1Н, S); 8,50 (Ш, S); 9,62 (1Н, d, I 9 Гц); 12,58 (1Н, S).

13). Предкультурная среда: бульон триптиказа con (BBL). основная культуральная среда, г: Глицерин Пептон Кукурузная барда Сухие дрожжи Карбонат натрия КН.РО NajHPO - 12Н20 Указанные компоненты растворяют в воде так, чтобы общий объем составит 100 МП и рН доводят до 7,2. Основ ной культуральный бульон (100 мл) помещают в колбу Сакагуси на 500 мл 35 и стерилизуют при 120fС в течение 20 мин. В эту среду инокулируют культуральный бульон (1 мл) каждого из микроорганизмов, которые выращивают в прекультуральной среде соответственно и затем встряхивают 48 ч при 30®С. Реакция: в 1 мл указанного культурального бульона добавляют О,1 г субстрата, суспендированного в О,1 М

фосфатном буфере (1 мл, рН 7,2) затем смесь встряхивают при 30°С в течение 48 ч.

По окончании реакции с целью идентификации выращенного продукта реакционную смесь хроматографируют на целлюлозе Истмен хроматограм 6065-при комнатной температуре. В качестве проявляющего реагента применяют (А и Б соответственно) верхний 5S слой смеси бутанола, этанола и воды (4:1:5 по объему) и смесь пропанола и воды (7:3 по объему). Величину R f

определяют по индексу противомикробного действия против чувствительного штамма.

В результат при работе на целлюлозе Истмен хроматограм 6075 наблюдают только одно пятно, показывающее каждый из продуктов Т (син-изомер 7Г-(2-формамидо-4-тиазолил)-2-ме-- токсииминоацетамидоЗ-3-цЁфем-4-карбоновая кислота) и II (син-изомер 7-С2-(2-амино-4-тиазолш1)-2-метокси-. иминоацетамидо.З-З-цефем-4-карбоновая кислота), без обнаружения пятен для каждого из субстратов 1 (син-изомер 4-нитробензил (формамидо-4-тиазолил) -2-метоксииминоацетамид6 ,j-3-цефем-4-карбоксш1ат) и 11 (синизомер 4-нитробензил 7- 2-амино-4-тиазолил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксш1ат). Величина Rf показана в табл. 4. .

Таблица 4 сме дис ма зул

50

Bacillus subtilis lAM 1069

75 75 75 85 sphaericus lAM 1286 subtilis lAM 1107

subtilis IAN 1214 Corynebacteriumequi lAM 1038 95 Micrococcus varians lAM 1314 70 Elavobacteruim rigens Продукт, полученный в реакционной си, анализируют методом бумажных ков с помощью чувствительного штамEscheriehia coli ES „ (культура: С, 16 ч), выход рассчитывают. Реьтаты приведены в табл.5. Таблица 5 1710 Продолжение табл. 5 lAM 1238 85 90 Salmonela typhimurium 1Ш 1406 90 20 Staphylococcus epidermides lAM 129690 95 Microbacterium flaomu о lAM 1642 90 95 Ниже приводятся примеры фармацевтических композиций, полученных в соответствии с изобретением и содержащих в качестве активного вещества син-изомер 7- 2 аМино-4-тиазолш1)-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновую кислоту (соединение А). П р и м е р 2. 1). 1,04 бикарбоната натрия добавляют к раствору 2,6 г син-изомера хлоргидрата (2-амино-4-тиазолш1)-2-метоксииминоацетам1адоЗ-3-цефем-4-карбоноврйкислоты в 100 мл воды при охлаждеНИИ льдом и раствор перемешивают при комнатной температуре. Полученный раствор лиофнпизируют и получают син-изомер (2-амино-4-тиазолил) -2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата натрия. ИК 3100, 1760, 1650, 1590 1530 см- ЯМР - сЛ ч/млн: (ДаО): 3,60 (2Н, широкий q); 4,00 (ЗН S); 5,22 (1Н, d); 5,88 (1Н, d); 6,35 (1Н, q); 7,03 (1Н, S). 2). 5 г син-изомера (2-амино -4-тиазолил) -2-мётоксииминоацетамид -З-цефем-4-карбоНовой кислоты посте- пенно добавляют к 30 мл водного раствора 1,04 г бикарбоната натрия при 35-40 С и перемешивают при 50-53 0 30 мин. После удаления нерастворимых веществ из полученного раствора фильт рат обрабатывают 0,3 г активированного УГЛЯ и фильтруют. Фильтрат лиофилизируют и получают 4,2 г син-изомера (2-амино-4-тиазолил)-2-метоксиимйноацетамидоЗ 3-цефем-4-карбоксилата натрия. ИК 3300-3100, 1760, 1.670, Т595, 1530 . 2 ЯМР- Гч/ипн (DMSO - д): 3,50 (2H, широкий S); 3,83 (3H, S); 5,00 (1H, d, I, 5 Гц); .5,68 (1H, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,13 (1Н, широкий S); 6,73 (1Н, S): 7,3 (2Н, широкий S); 9,60 (р, d, S 8 Гц). 3). 1,15 г син-изомера 7 -{2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоновой кислоты добавляют к водному раствору 0,111 г гидроокиси кальция в 100 мл воды и раствор перемешивают при комнатной температуре 10 мин. После фильтрации фильтрат лиофилизуют и получают 1,2 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилатакальция. ИК -VM.T: 3350,. 1760, 1670, 1590, 1535, 1465 CMi ЯМР -сГ ч/млн. (fljO): 3,51 (1H;d, I 5 Гц); 3,59 (1Н, d, I 3 Гц); 3,97 (ЗН, S); 5,15 (1Н, d, I 5Гц); 5,82 (1Н, d, I 5 Гц); 6, 33 (1Н, dd, Гц, 3 Гц); 6,95 (1Н, S). 4) 1,15 г син-изомера 7-t2-(2-aминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоновой кислоты добавляют к суспензии 0,088 г гидроокиси магния в 100 мл воды и смесь перемешивают при 70С 30 мин и получают раствор. После его фильтрации фил)Трат лиофилизуют и получают 1,1 г син-изомера (2-амино-тиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбоксилата магния. ИК 3350, 1760, 1660, 1610, 1530, 1460 см ЯМР -cfч/млн. (fljO): 3,53 (1Н, d, Гц); 3,59 (1Н, d, I 3 Гц); 3,96 (ЗН,. S): 5,16 (1Н, d, I 5 Гц); 5,84 (1Н, d, I 5 Гц); 6,32 (1Н, dd, I 5 Гц, 3 Гц): 7,98 (1Н, S). 5). 1,15 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоновой кислоты добавляют к раствору 0,523 г аргинина в 50 мл воды и раствор перемешивают при коМнатной температуре 10 мин. Смесь отфильтровывают, фильтрат лиофилизуют и получают 1,35 г син-изомера аргининовой соли (2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карбоновой кислоты. ИК , 3150, 1770, 1650 (широкий), 1580, 530, 1460 см. ЯМР -cA(fljO), ч/млн.): 1,4-2,1 (4Н, га); 3,22 (2Н, t, I 6 Гц): 3,55 (1Н, d, I 6 Гц); 3,65 (1Н, d, Гц); 3,82 (1Н, d, I 6 Гц); 3,97 (ЗН, S); 5,18 (1Н, d, I 5 Гц); 5,85 (Ш, d, I 5 Гц); 6,33 (1Н, dd. I 6 Гц, 3 Гц); 7,00 (1Н, S). 6). 1,21 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата натрия добавляют к раствору 0,55 г хлоргидрата лизина в 12 мл воды. Раствор лио филизуют и получают 1,6 г син-изомера лизиновой соли (2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -цефем-4-карбоновой кислоты. ИК -Умакс 350, 3150, 1770, 1600 (широкий, 1530, 1460 смЧ ЯМР -сА(Д..,0), ч/млн.): 1,3-2,1 (6Н, т); 3,03 (2Н, t, 1 7 Гц); 3,54 (1Н, d, I 5 Гц); 3,64 (1Н, d, I 3 Гц); 3,80 (1Н, d, Гц); 3,97 (ЗН, S); 5,17 (Ш, d, 1 5 Гц); 5,84 (1Н, d, I 5 Гц); 6,32 (Ш, dd I 5 Гц и 3 Гц); 6,99 (Ш, S) . 7). 20%-ный водный раствор едкого натрия добавляют к суспензии 15 г син-изомера 7-С2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоновой кислоты в смеси 8 м этанола и 8 мл вода при комнатной температуре для создания рН раствора 7,5. После фильтрования и промывки фильтрат и промывки соединяют (в них содержится 18,3 мл воды) и к ним добавляют по каплям 46 мл этанола при 20-25 С при перемешивании, которое продолжают при такой же температуре 30 мин. К смеси добавляют 28 мл этанола по каплям в течение 30 мин и пе , ремешивают при такой же температуре 30 мин..Осадок отфильтровывают, промывают- 20 мл этанола, сушат в вакууме при комнатной температуре и полу|Чают 13,5 г пластинок син-изомера ди гидрата 7-t2f(2-aминoтиaзoл-4-ил)-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоксилата натрия с т.пл. 260 С . (разлож). ИК 3430, 3260, 1760. (плечо), 1745, 1650, 1630 (плечо), 1590, 1540 см 8). 15 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил) -2-метоксиимйноацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоксилата натрия в 13 мл воды при 35растворяют45 С при перемешивании. К перемешиваемому раствору по каплям добавляют 52 мл теплового (30 С) этанола и при этой температуре перемешивают 5 мин. 109 20 а затем при комнатной температуре еще 2ч. Осадок отфильтровывают промывают этанолом, сушат в вакууме я получают 13,45 г син-изомера дигид- рата 7-С2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидоЗ-З-цефем-4-карбоксилата натрия в виде пластинок. 9). 4 н. раствор едкого натрия в воде осторожно по каплям добавляют к перемешиваемой суспензии 52 г синизомера (2-аминотиаз0л-4-ил)-2-метоксиИминоацетамидо1-3-цефем-4 У-карбоновой кислоты в 100 мл воды ниже для подщелачивания раствора до рН 7,0-7,5. 11о.сле фильтрования и промьшки соединенный фильтрат и промывки (200 мл) по каплям добавляют к 2 мл этанола при перемешивании в течение 30 мин, затем перемешивают при комнатной температуре , 15 мин и при 1 1. Осадок отфильтровывают промьгоают 200 мл этанола, сушат в вакууме при и получают 46,3 г син-изомера аморфного 7-f2-(2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилота натрия, ИК -. 3400, 3309, 3170, 1750, 1650, 1580 смЧ 10). Суспензию 10 г син-изомера (2-аминотиазол-4-ил)-2-метоксииминоацетамидо О-З-цефем-4-карбоксилата натрия в 250 мл метанола обрабатьтают ультразвуковым прибором и получают прозрачный раствор.Остаивают при комнатной температуре, затем перемепшвают при той же температуре 3ч. Осадок отфильтровьшают и промьтают метанолом, ползгчают аморфный син-изомер 7.(2-аминотиазол-4-ил -2-метоксииминоацетамидо}-З-цефем-4-карбоксилата натрия. 11). Кристаллы, полученные в примере 2 (7), сушат над в вакууме в течение 1 дня при комнатной тем- пературе и получают другие пластинки син-изомера (2-аминотиазол-4-Ш1)-2-метоксииминоацетамидо -3-цефем-4-карбоксилата натрия. 12). Лиофилизованный препарат для инъекций. 20 г натриевой соли соединения А растворяют в 200 мл воды и по 5 мл раствора .заполняют в пузырьки на 10 мл. Эти пузырьки замораживают и сушат в вакузт е (лиофилизация). 21 13). Суспензия для инъекций. Соединение А 25 г Метилце плюлоза 0,5 г Метил 4 оксобензоат 0,1 г Полисольват 80 0,1 г Хлоргидрат лидокаина 0,5 г Вода для инъекций До 100 мл Эта водная суспензия пригодна дл внутримышечных инъекций. 14), Таблетки Соединение А 500 мг Лактоза375,5 мг Оксипропилцеллюлоза2 мг Стеарат 1 агния 22,5 мг. Из такой смеси изготовляют табле ку для перорального введения при лечении инфекционных заболеваний, вызванных патогенными бактериями-. 15). Капсулы Соединение А 500 мг Стеарат магния 10 мг Из такой смеси изготовляют капск лу для перорального введения при ле чении инфекционных заболеваний, вызванных патогенными бактериями. Пример 3. 1). (2-Аминотиазол-4-ил)-2-п -бутоксииминоаце амидо -3-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). 3320, 1775, 1660 смЛ ЯMPc(ДMCO-d , ч/млн.): 0,88 (ЗН t, I 7 Гц); 1,1 1,9 (4Н, т); 3,5 (2Н, широкий S); 4,05 (2Н, t, I 7 Гц); 5,08 (1Н, d, I 5 Гц); 5,80 (1Н, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,44 (1Н, широкий S); 7,18 (2Н, S); 9,51 (1Н, d, I 8 Гц). 2). (2-Аминогиазол-4-ил)-2-изо-бутоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). 3330, 1780, 1665, 1630 1545 см-ч. ЯМР t(mCO-d(,, ч/млн.): 0,89 (6Н d, I 7 Гц); 1,6 ,2 (1Н, т); 3,58 (2Н, широкий S); 3,84 (2Н, d 1-7 Гц); 5,10 (1Н, d, I 5 Гц); 5,82 (1Н, dd, I « 5 Гц, 9 Гц); 6,46 (Ш, широкий S); 6,68 (1Н; S); 7,20 (2Н, S); 9,53 (1Н, d, I 9 Гц). 3). 7-С2-(2-Аминотиазол-4-ил)-2-циклогексилоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоновая кислота (синизсмер). ИК/мркс 3350, Г775, 1665, 1620, 1540 см- ЯМР cA(flMCO-d, ч/млн,); 0,8 Л 2,2 (ЮН, т); 3,60 (2Н, широкий S); 2 4,04 (1Н, т); 5,09 (1Н, d, 1 5 Гц) 5,83 (1Н, dd, I 5 Гц, 9 Гц); 6,45 (Ш, t, 1 4 Гц); .6,67 (Ш, .S); 7,19 (2Н, S); 9,48 (1Н, I 9 Гц). 4). (2-Аминотиазол-4-ил)-2-аллилоксииминоацетамидоЗ-3-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). 3300, 1780, 1660, .1630 см-1. HMPo(ZWCO-d6, ч/млн.): 3,67 (2Н, d, I 4 Гц); 4,67 (2Н, т); 5,17 (1Н, d, I 5 Гц); 5,25 (1Н, т); 5,50 (1Н, т); 5,90 (Ш, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,03 (1Н, т); 6,55 (1Н, т); 6,80 (1Н, S); 7,50 (2Н, га); 9,68 (1Н, d, I 8 Гц). 5). 7-12-(2-Aминoтиaзoл-4-ил)-2-пpoпapгилoкcииминoaцeтaмидo 3-3-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). ИК :3500, 3300, 1780, 1720, 1660, 1630 см HMPc(flMCO-dfc, ч/млн.): 3,48 (1Н, т); 3,67 (2Н, т); 4,80 (2Н, d, I 2 Гц); 5,17 (Ш, d, I 5 Гц); 5,88 (1Н, dd, I 5 Гц, 8 Гц); 6,55 (Ш, т); 6,85 (1Н, S); 7,33 (2Н, т); 9,73 (Ш, d, I 8 Гц). 6) 7-С2-(2-Аминотиазол-4-ил)-2-гексилоксииминоацетамидо -З-цефем-4-карюоновая кислота (син-изомер). HK--j ° 3250, 1760, 1640, /MOtKC 1600 смП flMPd(flMCO-de, ч/млн.): 1,88 (ЗН, т); 1,1 у«1,9 (8Н, т); 3,60 (2Н, т); 4,06 (2Н, t, I « 6 Гц); (Ш, d, 1 5 Гц); 5,82 (1Н, dd, Гц, 8 Гц); 6,46 (Ш, ш); 6,70 (1Н, S); 7,26 (2Н, т); 9,56 (1Н, d, I - 8 Гц). 7). (2 Аминотиазол-4-Ш1)-2-пентилоксииминоацетамвдоЗ-З-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). 3300, 1775, 1650, 1540 см-1. HMPcf(flMCO-dt, ч/млн.): 0,6-2,0 (9Н, т); 3,56 (2Н, d, I 2 Гц); 4,03 (2Н, t, I - 6 Гц); 5,08 (1Н, d, I 5 Гц); 5.81 (Ш, dd, 1 5 Гц, 8 Гц); 6/6 (Ш, t, 1 4 Гц); 6,69 (Ш, S); 7,20о(2Н, S); 9,15 (Ш, d, I 8 Гц). 8). 7-С2-(2-амиНоТиазол-4-ил)-2этоксикарбонилметоксииминоацетамио -3-цефем-4-карбоновая кислота (син-изомер). HKVJJI : 3250, 3050, 1775, 1720, 1660, 1630, 1550 ciri HMPci(flMCO-d/, ч/млн.): 1,21 (ЗН, , I 7 Гц); 3,59 (2Н, S); 4,14