Способ окрашивания нейронов Советский патент 1984 года по МПК G01N1/31 G01N33/48 

СО

05 Изобретение относится к медицине. Известен способ окрашивания нейронов с помощью люминесцентного красителя бисбензимида 1. Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является способ окраши вания нейронов при люминесцентном исследовании ткани мозга с помощью пероксидазы хрена 2. Однако дифференциацию окраски структур нейрона невозможно проводить указанными способами, поскольку свечение окращенных флюорохромами структур нейронов слабое, аксонный транспорт красителей осуществляется на короткие расстояния в мозге животных. Целью изобретения является дифференциация окраски структур нейрона. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу окрашивания нейронов при люминесцентном исследовании ткани мозга с помощью пероксидазы хрена дополнительно проводят окрашивание в бис-бензимиде на фосфатном буфере при рН 2,0- 2,5 в течение 15-30 с. Способ осуществляется следующим образом. Из фиксированной в глютаральдегиде и формалине ткани мозга изготавливают на замораживающем микротоме срезы толщиной 20-30 мкм. Производится гистохимичес кая окраска срезов для выявления пероксидазноактивных структур. Срезы после короткой промывки в холодном фосфатном буфере (0,1 М; рН 7,2) с добавлением 10% сахарозы переносят на 15-30 с в подкисленный соляной кислотой (до рН 2,0-2,5) водный раствор натрия фосфорнокислого однозамещенного (0,1 М), который также содержит 10% сахарозы. Без промывки срезы натягивают на предметные стекла и высуUJИвaют. Производится обычными методами обезвоживание, просветление срезов и заключение их на нредметных стеклах в нелюминесцирующую среду (эпон - 812). Пример. Из фиксированной в глютаральдегиде и формалине ткани мозга изготавливают на замораживающем микротсме срезы толщиной 20 мкм. Производится гистохимическая окраска срезов для выявления пероксидазноактивных структур 2. Срезы после короткой промывки в холодном фос фатном буфере (0,1 М; рН 7,2) с добавлением 10% сахарозы переносят на 15 с в подкисленный соляной кислотой до рН 2,0 водный раствор натрия фосфорнокислого однозамещенного (0,1 М), который также содержит 10% сахарозы. Без промывки срезы натягивают на предметные стекла и высушивают, обезвоживают, просветляют срезы и заключают их на предметных стеклах в нелюминесцирующую среду (эпон - 812). Наблюдение меченных пероксидазой хрена и флюорохромом клеток производится в темном поле и свете люминесценции. Одновременное двухцветное свечение клеток - золотистое (цитоплазмы) и зеленое (ядра) - указывает на двойное их мечение ферментом и люминесцентным красителе.м. Такой же эффект налюдают в случае, если используют фосфатный буфер при рН 2,5 и в течение 30 с. Предлагаемый способ по сравнению с известными способами окраски нейронов флюорохромами обладает большей чувствительностью и позволяет дифференцировать CTpjKTypbi нейрона.

СПОСОБ ОКРАШИВАНИЯ НЕЙРОНОВ при люминесцентном исследовании ткани мозга с помощью пероксидазы хрена, отличающийся тем, что, с целью дифференци aii.HH окраски структур нейрона, дополнительно проводят окрашиванием бис-бензкмиде на фосфатном буфере при рН 2,0-2,5 в течение 15-30 с.