Способ определения нервных клеток Советский патент 1989 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в нейроанатомии и

ГИСТОЛОГ ИИ.

Цель изобретения - улучшение способа определения нервных ютеток, меченных пероксидазой.

Пример. Крыса № 214. Под нембутало- вым наркозом (40 мг/кг) стереотаксически в хвостатое ядро вводили 50%-ную нероксида- зу .хрена с RZ 2,4 в количестве 0,5 мкл на 2%-ном водном растворе диметилсульфокси- да. В контрлатеральное ядро вводили 3 мкл 10%-ного раствора цримулина на 2 /о-ном водном растворе диметилсульфоксида. Рану ушивали наглухо. Через 2 сут после инъекции под нембулатовы.м наркозом (50 мг/кг) крысу внутрисердечно нерфузировали ным раствором хлористого натрия с добавлением сосудисторасширяюших средств и гепарина. Далее животное перфузировали холодным фиксатором (3,5% параформа, 0,25% глютаральдегида, 5% сахарозы на фосфатном буфере с рН 7,2). Голову животного обкладывали льдом. Промывали 10%- ным раствором сахарозы. Извлекали головной мозг. Резали на замораживающем микротоме на срезы толщиной 40 мкм, которые храни.ли в холодиль 1ике в ЗО - /о-ном растворе сахарозы на фосфатном буфере. Перед окраской срезы переносили в ф(х:фатный фер без сахарозы с рН 72 нри 20°С на 30 мин, через каждые 10 мин меняя раствор. После угого срезы перенесли в 0,02°/,|-ный раствор ортофенилендиамина на ацетат))ом с рН 4,0, где срезы находились в темноте ири 18°С в течение 20 мин для пропитки. Далее в раствор ортофенилендиамина добавили 0,01%-ный раствор перекиси водорода, тщательно распределяя его по всему объему красителя, и оставили в темноте на 20 мин. После окончания окраски реакцию останавливали путем тре.хкратной промывки срезов но 5 с в ледяном ацетатном б фере с рН 4,0. Затем срезы монтировали в 0,1 /о-ном )аст- воре желатина на предметные стекла. Срезы ставили на ti04b в холодильник д,-|я сушки. Через 18 ч высушенные ср( эы на предметных стеклах обезвоживали послед()вател1 но в 96° абсолютнсхм спирте, иросвет,пя, 1и 5 мин в толуо.те и заключали в ЭПОН 812. Срезы

сл

ел

со о: СП сд

31519655д

ii|)()CMii грива.пи на люминесцентном микро-меткой с последующим анализом в ультраскопе с фильтром пропускания 470-1050 нмфиолетовом свете, отличающийся тем, что,

для выявления нейтронов, содержащие перо-с целью повышения устойчивости пероксидазксидану с фильтром пропускания 302-ной метки к ультрафиолетовому облучению,

460 нм для выявления свечения нримулина. 5 гистологические срезы окрашивают 0,02%ным раствором ортофепилендиамина с добав- Фирмула изобретениялением перекиси водорода при 18-20°С в

течение 20-45 мин с трехкратной промыв(люсоГ) определения нервных клеток пу-кой срезов в растворе ацетатного буфера

тем м;1ркир( нейронов перокспдазнойпри рН 4,0 и температурой 2-4°С.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в нейроанатомии и гистологии. Целью изобретения является улучшение способа определения нервных клеток, меченных пероксидазой и флюохромом, путем повышения устойчивости окраски к действию ультрафиолетовых лучей. Способ заключается в определении нервных клеток, меченных пероксидазой, путем выявления их окраской 0,02%-ным раствором ортофенилендиамина с добавлением 0,01-0,03%-ного раствора перекиси водорода с последующей холодной промывкой при 2-4°С в ацетатном буфере при PH 4,0 и оценкой результатов при микроскопии как в видимом, так и в люминесцентном свете.