Способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы Советский патент 1984 года по МПК A61K38/17 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения диагностических препаратов из биологически активного сырья.

Известен способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы путем замораживания двенадцатиперстных кишок йиней, их измельчения, автолиза в течение 72 ч при температуре от 40 до 45°С в присутствии соляной кислоты с последующим центрифугированием и фильтрацией полученного раствора I.

Однако этот способ крайне трудоемок.

Известен также способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудоч ной железы, включающий измельчение вареных двенадцатиперстных кишок свиней, их экстракцию 1,5 объемом 0,5 н уксусной кислоты при рН 3,0-4,0, температуре 18-25°С в течение 20 ч, отделение экстракта с последующим отделением балластных белков ha активированном угле, отделение экстракта от балластных белков и активированного угля центрифугированием, прогрев экстракта при 60-70°С в течение 3,5-4,5 ч, осаждение балластных белков при рН 4-5, температуре 4-6°С в течение 16-18 ч, отделение балластных белков центрифугированием, фильтрацию раствора, добавление стабилизатора ,и сублимационную сушку целевого продукта. Продолжительность получения 160 флаконов препарата по данному способу составляет 80-90 ч {21.

Однако данный способ получения препарата является длительным процессом, а получаемый препарат имеет больщую дозу балластных веществ, плохую растворимость и невысокий выход.

Цель изобретения - сокращение времени проведения процесса и повышение выхода целевого продукта.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы, включающему измельчение вареных двенадцатиперстных кишок свиней, их экстракцию уксусной кислотой, отделение экс-. тракта, его очистку и последующую сублимационную сушку, после отделения экстракта его наносят на смолу «Биокарб-Т, затем отмывают смолу раствором уксусной кислоты с рН 3,3-3,5, элюируют целевой продукт раствором уксуснокислого аммония с рН 8,9-9,1 и осаждают его ацетоном при соотнощении элюат-ацетон 1:4.

Пример 1. 1 кг промытых, прогретых в воде при 96°С в течение 10 мин двенадцатиперстных кишок свиней измельчают на мясорубке, заливают 3,0 л 0,5 н раствором уксусной кислоты и экстрагирукл- в течение 4 ч при 20-22°С. Отделяют жмых через капроновое сито, фильтруют через бумажный фильтр и сорбируют активное вещество на смоле «Биокарб Т. Затем через смолу последовательно пропускают буфер (0,5 н раст5 вор уксусной кислоты) для отмывки смолы от балластных белков, элюируют активное вещество буфером с рН 9,0 (0,25 М раствор уксуснокислого аммония). Полученный элюат осаждают в холодном (4-6°С) ацетоне в соотношении (элюат-ацетон) 1:4. Полученньж осадок растворяют в дистиллированной воде и высушивают сублимированием. Вес .активной фракции 7,2 г; активность 3,5 кл. ед.; выход 25200 ед/кг.

Пример 2. кг промытых, прогретых в воде при 96°С в течение 10 мин двенадцатиперстных кишок измельчают на мясорубке, заливают 4 л 0,5 н раствором уксусной кислоты, экстрагируют при перемешивании в течение 5 ч при 20-22°С. Отделяют жмых

0 через капроновое сито, фильтруют через бумажный фильтр и сорбируют на смоле «Биокарб-Т. Затем через смолу последовательно пропускают буфер (0,5 н раствор уксусной кислоты) для отмывки смолы от балластных белков и десорбируют активное вещество буфером с рН 9iO (0,25 М раствором уксуснокислого аммония). Полученный элюат осаждают в холодном (4-6°С) ацетоне. Осадок растворяют в дистиллированной воде, высушивают сублимированием. Вес

0 активной фракции 6,0 г; активность 3,4 кл. ед; выход 20400 ед/кг.

Пример 3. 1 кг промытых, прогретых при 96°С в воде двенадцатиперстных кишок свиней измельчают на .мясорубке, заливают

5 2,0 л 0,5 н раствора уксусной кислоты, экстрагируют перемешиванием в течение 3 ч при 20-22°С. Отделяют жмых через капроновое сито, фильтруют через бумажный фильтр. Полученный раствор сорбируют на смоле «Биокарб-Т, затем последовательно пропускают буфер (0,5 н раствор уксусной кислоты) для отмывки смолы от балластных веществ, элюнруют активное вец ество буфером с рН 9,0 (0,25 М раствор уксуснокислого аммония). Элюат осаждают в холодном

ацетоне (4-6°С) в соотношении 1:4 (элюатацетон). Полученный осадок растворяют в дистиллированной воде и высушивают сублимированием. Вес активной фракции 5,8 г; активность 3,0 кл. ед.; вЫход 17400 ед/кг.

Активность полученных образцов определяют биологическим методом по Сватосу. Чистоту препарата и его фракционный состав - методом электрофореза в полиакриламидном геле в сравнении с препаратом «Секретин английской фирмы «Boots.

Сопоставительный анализ технико-экономических показателей предлагаемого способа и прототипа приведен п таблице.

Как следует из таблицы, предлагаемый способ получения средства для диагностики заболеваний поджелудочной железы позволяет интенсифицировать процесс в-2 раза и увеличить выход целевого продукта с 400 до 25000 ед/кг, получить высокоочищенное и качественное средство.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ .ЖЕЛЕЗБ1, вклЕочающий измельчение вареных двенадцатиперстных кишок свиней, их экстракцию уксусной кислотой, отделение экстракта, его очистку и последующую сублимационную сушку, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени проведения процесса и повышения выхода целевого продукта, после отделения экстракта его наносят на смолу «Биокарб Т, затем отмывают смолу раствором уксусной кислоты с рН 3,3-3,5, элюируют целевой продукт раствором уксуснокислого аммония с рН 8,9--9,1 и осаждают его йцетоном при соотношении элюат-ацетон 1:4.