Способ диагностики целиакии Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

113

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам диагностики, и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронических заболеваний тонкой кишки и специфических подходов к лечению.

Цель изобретения - повышение точности дифференциальной диагностики целиакии и хронического энтерита.

Способ осуществляется следующим образом.

У больных натощак берут из локтевой вены 4 мл крови в пробирки с гепарином (25 ед. на 1 мл). В пробирки доливают равный объем физиологического раствора. Для выделения лимфоцитов 4 мл разведенной крови наносят на 2 мл раствора фиколл-верогра- фина (плотность 1,08) и центрифуги-т руют 30 мин при 3 тыс. об./мин. Полученное белое кольцо (лимфоциты и моноциты) отсасывают пипеткой в сухую пробирку и дважды отмывают сре- зой 199 (по 5 мл) с повторными центрифугированиями по 5 мин, при 1500 об./мин. Полученную суспензию для удаления прилипающих клеток инкубируют на пластиковых чашках Петр в термостате при 37°С в течение 30 мин. Затем подсчитывают лимфоциты в камере Горяева. Концентрация лимфоцитов доводится до 1 10 в 1 мл. Суспензию лимфоцитов вносят в пробирки (не менее 5 параллельных проб) по 0,1 мл и смешивают с равным объемом раствора антигена-глиадина, приготовленного на физиологическом растворе рН 7,2-7,4, и в контрольну пробирку - 0,1 мл физиологического раствора вместо антигена. Пробирки инкубируют в течение 1 ч в термоста7

те при 37 С. Взятые дозы глиадина являются оЛтимальными ,так как дозы ниже 3,5 мг/мл не дают стабильности показателей свечения, а дозы больше 5,5 мг/мл токсичны для мембраны -лимфоцитов. После инкубации лимфоциты осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1500 об./мин, на- досадочную жидкость осторожно сливают, осадок ресуспендируют 1 мин и дважды отмывают в 5 мл физиологического раствора по 5 мин с последующим центрифугированием.

Для определения флюоресценции в пробирки доливают по 2,5 мл физиолгического раствора и 0,05 мл 5i10

раствора 1-анилино-В-нафталиносуль- фоната (АНС ) - отрицательно заряженного хромофора, флюоресценцию регистрируют на спектрофлюориметре. Квантовый выход возбуждают при 470 им и регистрируют при 470 нм. Количественные показания на шкале прибора свидетельствуют об интенсивности свечения мембраны лимфоцитов, и выражают их в относительных единицах.

В результате исследования лимфоцитов периферической крови у больных целиакией и хроническим энтеритом II степени тяжести при действии глиадина выявлены значительные различия в интенсивности флюоресценции.

Полученные данные показывают, что только у больных целиакией выявляется интенсивная флюоресценция лимфоцитов после обработки их глиади- ном. Интенсивность свечения лимфоцитов у больных целиакией при действии глиадина достаточно отличалась от по- казателей флюоресценции у больных хромическим энтеритом II степени тяжести (р 0,001). Следовательно, в реакции выявляется специфическая реакция лимфоцитов у больных целиакией после предварительной обработки их глиадином.

Пример 1. Больная Т., 39 лет. Жалобы: на частый жидкий стул, боли по всему животу, снижение апетита,

5 периодические судороги мышц конечностей, потерю в весе. Анамнез: больна с 18 лет, когда периодически появлялись боли в животе и жидкий стул. С 30 лет ежегодные по 2-3 раза обост0 рения, стала терять в весе. Лечилась амбулаторно, но без эффекта.

Осмотр: Резко пониженное питание (рост 170 см, вес 49 кг). Кожные покровы и видимые слизистые - выра5 женно бледные. Повьш1енная ломкость ногтей и выпадение волос. Язык обложен белым налетом с отпечатками зубов по краям. Симптом .мьш1ечного валика положительный. Живот вздут, болезненный по ходу толстой кишки.

0

5

Определяется шум плеска в слепой кишке. Печень и селезенка не пальпируются.

Анализ крови: э 3,8, нем. 11,0%, ЦП 0,89, л 4,0 п. 1, с 51, э 2, лим 36, м 10, СОЭ 4 мм/ч. Общий белок 7,54 г7., алью. 4,29г%, глоб. 3,25г%. Пробы на всасываемость: с Д-ксило- зой 2 ч - 0,8 г, 5 ч - 1,2 г (умеренное снижение); общие жирные кислоты: 7,6 г/ч, свободные жирт1ые кислоты 4,3 г/ч - умеренное увеличение. Иммуноглобулины сыворотки: А 110 мг% (55-251), М 125 мг7о (68-350 G 260 мг% (97-235). Рентгеновское исследование тонкой кишки: петли то кой кишки выполняются равномерно. Тонус несколько снижен. Пассаж ускорен. Рельеф равномерно перистый без грубых видимых изменений. Предварительный диагноз: хронический энтерит II степени тяжести. Дополнительное исследование лимфоцитов периферической крови после стимуляции их глиадином позволило поставит заключительный диагноз - хронически энтерит II степени тяжести, так ка интенсивность флюоресценции равнялась 1,1, что было достоверно ниже показателей у больных целиакией, средняя арифметическая интенсивность которых равнялась 5,79 ед.

Подтверждением правильности поставленного диагноза с помощью метода флюоресцентных зондов с использованием обработки лимфоцитов глиадином явилось выздоровление от проведенного лечения.

В качестве другого примера представлена история болезни, где также трудно было диагностировать целиакию Так как имелось атипичное клиническое течение заболевания, наличие редко встречаемых при данной патологии симптомов. I

П р и м е р 2. Больная С., 29 лет Жалобы: на частый жидкий стул, вздутие живота, боли по всему животу, слабость, головокружение, кровото- чивость десен, появление синяков пЪ коже, судороги кистей рук, похудание.

Анамнез: больна с 24 лет, когда после родов появились упорные запоры сменявшиеся на поносы, вздутие живота, позднее с 26 лет - повышенная кровоточивость десен, судороги мышц конечностей.

Осмотр: пониженное питание (рост 169 см, вес. 58 кг), меренная сухость кожи, истонченность и ломкость ногтей. Разрьгхленность и кровоточивость десен. Язык влажный, сосочки сглажены. Симптом мьшечного валика положительный, живот умеренно вздут новс-ех отделах, безболезненный, мягкий шум плеска в слепой

3ПН

KHuiKO, не определяется. Почемь и се- лезсмша не пальпируются.

Анализ крови: эр. 3,9, гсм. , 12,6г7„, л. 4,6, п. 2, с 60, э-2. 61, лим. 24, м. 11, СОЭ - 5 мм/ч. Общий белок 6,86г%, альб. 3,43, гамма-глоб. 15,2%. Пробы на всасыва емость с Д-ксилозой: 2 ч 0,38 г , 10 5 ч 0,65 г (снижена) ,общие жнрн,|е кислоты 38,1 г/ч, свободные жирные кислоты 22,3 г/ч(увеличена). Иммуноглобулины сыворотки: А 80 мг%, (55-251), К 110 мг% (68-350), G 15 210 мг% (97-235).

Рентгеновское исследование тонкой кишки: выраженные изменения двенадцатиперстной и верхних петель тощей

2Q кишки - слизь, жидкость впросвете, гипотония и гипокинезия. Рельеф сохранен, но сглажен и местами перестроен ,

Предварительный диагноз: хрони25 ческий энтерит II степени тяжести Целиакия.

Методом флюоресцентных зондов выявлена интенсивность свечения лимфо- 3Q цитов, стимулированных ин витро глиадином, равная 7,12. Полученная резко положительная реакция лимфоцитов на глиадин позволила диагностировать целиакию. Заключительный диагноз: Целиакия.

Раняя диагностика целиакии у больных хроническими заболеваниями тонкой кишки обеспечивает назначение ле- лечения с соблюдением диеты, исключающей из питания глиадин, и, как следствие, сохранение трудоспособности. Всего обследовано 52 4ejv (це- лиакия, хронический энтерит II степени тяжести, доноры).

35

40

Таким образом, предлагаемьй способ позволяет дифференцировать це- лиакию и хронический энтерит II степени тяжести по измене))ию интенсивности флюоресценции лимфоцитов периферической крови при действии глиади- нов. Для целиакии по сравнению с нормой характерно интенсивное свечение стимулированных глиадином лимфоцитов. Для больных хроническим энтериТОМ характерны низкие значения флюоресценции лимфоцитов, обработанных глиадином. Это позволяет повысить точ- точность в ранние сроки диагностики целиакии.

513433586

Формула изобретениякии и хронического энтерита, оценку

осуществляют флюоресцентным зондом

Способ диагностики целиакии пу- по интенсивности свечения лимфоцитов,

тем добавления глиадина к лимфоци- при этом глиадин добавляют в конценттам периферической крови больных с рации 3,5-5,5 мг/мл на Ь10 лимфоци- последующай оценкой реакции, о т - ов и при интенсивности свечения от личающийся тем, что, с це- з,3 до 9,7 ед. диагностируют целиа- лью повышения точности способа путем кию, а при интенсивности свечения

дифференциальной диагностики целиа- 0,4-2,8 ед. - хронический энтерит.

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности способа. Суспензию лимфоцитов смешивают с равным объемом раствора глиадина. После инкубации лимфоциты.осаждают. .Надосадочную жидкость сливают, осадок ресуспенди- руют, отмывают и центрифугируют. В пробирки добавляют раствор отрицательно заряженного хромофора и регистрируют флюоресценцию. Для целиа- кии характерно интенсивное свечение лимфоцитов. Способ позволяет диагностировать целиакию в ранние сроки. U) 00 tn эо