Способ определения активности тромбопластина плазмы крови Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

со

СП I Изобретение относится к медицине,, а именно биохимии, точнее к способам определения активности факторов свертьшания крови, и может быть использовано научно-исследовательскими и клинико-диагностическими лабораториями для изучения роли тромбопластина плазмы крови в процессах свертывания и в развитии нарушений свертывающей активности. Известен способ определения тром боппастина, заключающийся в том, что в исследуемой плазме устанавливается содержание 5-нуклеотидазы, являющейся индикатором наличия в кровотоке фрагментов клеточных мембран, представляющих собой тромбопластин. Определение 5 -нуклеотидазЫ; проводятся с помощью аденозин-5-монофосфорной кислоты (АМФ), которая гидролизуется с высвобождением неорганического фосфата преимущественно исследуемым фермен том. Появление неорганического фосфата при инкубации сьюоротки крови с AMP пропорционально активности нуклеотидазы, что косвенно отражает количество фрагментов кле точных мембран в кровотоке,1, К недостаткам известного способ ;относятся: недостаточная точность и специфичность, связанная с тем, что содержание в сыворотке 5 - нуклеоти дазы отражает только наличие фрагментов клеточных мембран и не отражает их активности в качестве тромбохщастина, а также с тем, что отщепление неорганического фосфата от АМФ катализирует не только 5 нукпеотидазу, но и другие фосфатазы, хотя и с меньшей скоростью, сложность определения, заключаю щаяся в том, что выполнение анализа требует приготовления семи реак тивов, из которых два неустойчивы при хранении, в связи с чем их нео ходимо готовить перед каждым определением, а также в тЬм, что окрас ка, развивающаяся при взаимодейств неорганического фосфата с молибден вым реактивом неустойчива и, следо вательно, колориметрия должна пров диться через строго определенный промежуток после начала реакции это затрудняет проведение серийных анализов. 12 Целью изобретения явfIяeтcя повышение точности способа. Поставленная цепь достигается тем, что согласно способу определения активности тромбопластина плазмы крови определяют время свертывания донорской и исследуемой плазмы в присутствии бестромбопластиновой плазмы, а активность тромбопластина определяют по формуле , 2 где А - активность тромбопластина исследуемой плазмы; t - время свертывания донорской гшазмы; t- - время свертьшания исследуемой плазмы. Способ осуществляют следуюпщм образом. Смешанную бестромбоцитную плазму 5-6 доноров центрифугируют 60 мин при 52000 g для удаления фрагментов клеточных мембран (получение субстратной бестромбопластиновой плазмы). Определяют время свертывания смеси равньпс объемов смешанной донорской бестромбоцитной плазмы и субстратной (бестромбопластиновой) плазмы. Затем определяют время свертывания смеси равных объемов исследуемой плазмы, освобожденной от тромбоцитов, и субстратной плазмы и по формупе А 100 определяют активность тромбопластина в исследуемой пробе. Пример . Получают субстратную бестромбоцитн5то плазму. Получают смешанную плазму 5 доноров и исследуемую плазму подготавливают для исследования (освобождают от тромбоцитов). Приготавливают смесь 0,1 мп донорской плазмы и 0,1 мл субстратной плазмы в пробирке на водяной бане при 37°С. Определяют время свертывания смеси, добавляя к ней 0,1 мл 0,55%-ного раствора хлорида кальция. Время свертывания 327 с. Аналогичным образом определяют время свертьшания смеси 0,1 мл исследуемой плазмы и 0,1 мл субстратной плазмы. Время свертьшания 248 с. Пользуясь формулой, определяют активность тромбопластина в иссле31114951 4

дуемом образце плазмы которая ока-Предложенный способ позволязьшается равной 131%.ет точно опредётшть специфичесПо результатам наблюдений, про- кую активность тромбопластина пу:веденных у 50 доноров, активностьтем излучения влияния исследуе- .

тромбопластина в условиях физиоло-5 мой плазмы на время свертывания

гической нормы колеблется в преде-субстратной плазмы, содержание

лах от 100 + 6,8%. тромбопластина в которой снижено

Воспроизводимость способа (5--100), помощью, центрифугирования.t

гаТочность возрастает н4 18 -20 7,.

установленная на основании 10 опре-JQ

делений активности тромбопластина,

выполненных в одном образце плаз-Кроме того, предлагаемый способ

мы, равна 4,1%. . прост в осуществлении.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТРОМБОПЛАСТИНА ПЛАЗМЫ КРОВИ, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют время свертьшания донорской и исследуемой плазмы в присутствии бестромбопластиновой плазмы, а активность тромбопластина определяют по формуле ) i А активность тромбопластина где исследуемой плазмы; время свертьшания донорской плазмы; i,i время свертьшания исследуемой плазмы. (Л