Способ определения концентрации общего холестерина в плазме крови Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

(/)

С

в

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ путем экстракции холестерина органическими растворителями и последующего проведения цветной реакции, о т- , личающийся тем, что, с целью повьш1ения точности, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавляют 0,950,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4% формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола

О)

со со ел

Изобретение относится к медицине и биологической химии, в частности к способам определения концентрации общего холестерина в плазме крови.

Известен способ определения концентрацин общего холестерина в плазм или сыворотке крови flJ.

Недостатком известного способа является использование венозной крови для последующего получения плазмы или сыворотки, что создает трудности при обследовании больных, особенно при повторном взятии крови для наблюдения динамики процессов и при обследовании детей.,

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемо результату является способ определения концентрации общего холестерина в малых объемах сыворотки крови, вклго- -, чающий омыление липидов, экстракцию холестерина петролейным эфиром, промывку экстракта водой и последующее фотометрирдвание 2.

Недостатком данного способа является длительность выполнения анализа необходимость использования специаль 1ого оборудования для микроанализа и невысокая точность.

Цель изобретения - повышение точности.

Поставленная цель достигается тем, что при определении концентраци общего холестерина в плазме крови согласно способу, включшощему экстрак-; дню холестерина органическими раство.рителями и последующее проведение цветной реакции, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавляют 0,950,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4% формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола (1:1), экстракт промывают водой и спектрофотометрически определяют концентрацию холестерина в плазме.

Способ поясняется следующими примрами.

Пример 1. Кровь в количестве 0,05 мл берут и5 пальца, вносят в центрифужную пробирку с 0,95 мл физиологического раствора, содержащего 0,35% формалина, перемешивают, центрифугируют при 1500 об/мин, отбирают 0,7 мл в центрифужную пробирку, приливают 4,5 мл смеси хлороформа и метанола (1:1) и 1,5 мл воды.

перемешивают, центрифугируют, верхни слой удаляют, хлороформный слой переносят в другую пробирку, хлороформ отгоняют, к сухому остатку приливают 1,5 мл 0,1%-ного раствора хлорного железа в ледяной уксусной кислоте и концентрированной серной кислоты, перемешивают, нагревают на кипящей водяной бане 1 мин. Оптическую плотность раствора измеряют с помощью ФЭК при длине волны 560 нм против цветного реактива. Стандартны пробы обрабатьгаают аналогичным образом. Одновременно определяют величину гематокрита с помощью микрометода Концентрацию холестерина в плазме рассчитывают по формуле:

Концентрация общего

от Ьоп X К холестерина, мг% i

: -

где и Е - оптическая плотност,

оп опытных и контрольны проб, соответственно;

ТГ

коэффициент, рассчитанный для данной величины гематокрита по формуле:

OiJ

0,7

+ V

где 0,1 - содержание холестерина в

стандартной пробе, мг; V - объем плазмы, мл, соответствующий объему полученной крови (рассчитывают по величине гематокрита); 0,7 - величина аликвоты. При взятии крови у 70 мужчин и 74 женщин различных возрастных групп получают следующие результаты, мг %: 17-29 лет - 196±9 и 204±7; 30-39 лет220±12 и 237+14; 40-49 лет - 205±17 и 239+7 и старше 50 лет - 232±6 -и 229+23 соответственно.

Пример 2. При параллельных определениях концентрации общего I холестерина в плазме крови двух обследуемых с помощью предлагаемого способа получены следующие результаты 196 , 194, 188, 190, 194, 188, 186 и 190 мг % и 282, 286, 290, 292, 296, 280, 280 и 286 мг %. Точность метода, рассчитанная для первого и второго случая, составляла ±2,1 и ±2,5% соответственно.

Пример 3. При определении концентрации общего холестерина в

плазме крови одних и тех же обследуе мых (определения проводили с интервалом 4-7 дней) d помощью предлагаемого способа получены следующие результаты, мг %: 280 и 287; 204 и 212; 196 и 178; 238 и 244; ЗОЗ. 296 и 308; 348, 296 и 323; 194 и 188; 164 и 172; 296, 300 и 304; 170 и 176 при первом .и повторных определениях соответственно.

Способ дает хорошую воспроизводимость результатов.

Пример 4. При определении концентрации холестерина в плазме крови 6 интактных кроликов по предлагаемому способу и способу-прототипу получены следующие результаты, мг %: 77,5 и 75,0; 67,8 и 7.0,6; и 81,5; 52,3 и 52,0; 72,0 и 70,0; 110,0 и 113,О соответственно. Средние значения равны 76,6 и 77,0 мг % соответственно, т.е. результаты, полученные с помощью предлагаемого способа и способа-прототипа, хорошо со гласуются.

Время, затраченное на проведение 6 анализов по предлагаемому способу, юоставило 75 мин, а по способу-прототипу более 3ч.

/