Штамм @ @ 3/2000-продуцент кофермента КоА Советский патент 1984 года по МПК C12N15/00 C12N9/00 C12P1/06 C12R1/465 

ч

00 1 1 Изобретение относится к микробиологии и касается изолирования нового штамма - продуцента кофермента КоА. Наиболее близким техническим реше нием к предлагаемому является культу ра Streptomyces fradiae, которая может продуцировать кофермент А lj . Однако в пределах вида не определена способность к биосинтезу кофермента КоА, а у известного штамма, выделенного Ваксманом (S.Waksman), не определена внеклеточная продуктив ность. Целью изобретения является выделение и изучение продуцента кофермен та КоА среди культур рода Streptomyces, способного расти на минеральной среде с дешевым источником углерода 1Нтамм Streptomyces lavendofuseus 3/2000 получен от исходной культуры Streptomyces lavendofuseus 1/586, выделенной из окультуренной дерновоподзолистой почвы Латвийской ССР путем естественного отбора. UlTa.MM Streptorayces lavendofuseus 3/2000 хранится в коллекции культур микроорганизмов ВНИИ антибиотиков под номером 1689 и характеризуется следующими признаками. Морфология. Спороносцы прямые, длинные с примитивными спиралями (RA.) , имеют два-три слегка растянутых завитка. Споры овальные, продолговатые, с гладкой оболочкой, размером 1,3-1,4x0,9 мкм. Культуральные свойства. На среде СР колонии бесцветные, воздушньй мицелий цвета лаванды. Органическая среда (мучная) темнеет, воздушный мицелий розово-сиреневый. Физиологические свойства. В качестве источников углерода ассимилирует фруктозу, мальтозу, сахарозу крахмал, слабее - ксилозу, глюкозу, глицерин. В качестве источников азо 18 2 та хорошо усваивает мочевину, по сравнению с солями аммония лучше усваивает соли нитратов. Тирозиназа отрицательная. Меланоиды не образует. Среда Треснера-Данга чернеет. Желатину разжижает, наблюдается слабое побурение среды. Нитраты восстанавливает до нитритов. Пептонизирует молоко. Антагонистические свойства проявляются слабо. Не патогенен. Использование штамма Streptomyces lavendofuseus 3/2000 для биосинтеза кофермента КоА. Пример 1. Штамм выращивают на косяках среды СР/ с крахмалом и глюкозой (1:1) 13 качестве источника углерода в течение 7-8 дней при 2627 С. Смыв конидий с одного косяка переносят в колбу, содержащую 50 мп среды. Дня получения более монокони-диальной суспензии смыв конидий Измельчают в ступке или дезинтеграторе MSE в течение 15 с (62,5 W/CM. Состав посевной среды, %: крахмал 2,0; 0,2; КьНРО. 0,1; КС1 0,05; MgSOi 0,05; смесь микроэлементов - 1 мл, вода диет. 1 л., рН 7,0-7,2. Продолжительность выращивания 30-34 ч. Посевной материал в количестве 10% от объема вносят в ферментационную среду, состав которой следующий, %: крахмал 3,0, NaNO 0,4; КлНРО 1,0; КС1 0,05; MgS04 0,05; смесь микроэлементов 1 мл, вода диет. 1 л, рН 7,07,2. Емкость колб 750 мл, среда в колбах 50 мл. Скорость вращения качалки 220 об/мин. Продолжительность ферментации 96 ч. Накопление КоА в клетках и в ферментационной среде определяют через каждые 24 ч. Максимальное накопление КоА как в клетках, так и в ферментационной среде наблюдается через 96 ч. Полученные данные отражены в табл.1.

Время кульопредеКоАтивирования, ч

В клетках

Таблица 1

.КоА, мкг/мл среды

В среде

Штамм Streptomyces lavendofuseus 3/2000 (коллекция культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков,коллекционный номер 1689) - продуцент кофермента КоА.

24 48 72 96

250 310 490 910

Метод ацилтиоМетодом Капла Примечание определяют и ин, и тем сам сравнению с м содержание ис 2. Штамм выращивают Пример аналогично примеру 1, однако в ферментационной среде используют различные источники углерода. Сравнительные результаты отражены в табл.2. Таблица 2

7,0 7,4 11,2 12,9

Str. lavendofuseus 3/2000

Str. fulvoviridis

Str. olivochromoferus

Str. violaceus Str. sporoclivatu Липмана, наряду с коферментом КоА, осфо-КоА, и 4-фосфопантотеноилцистеполучают увеличенные результаты по дом ацилтиокиназы, которым определяют ного КоА. Пример 3. Способность синтезировать кофермент КоА культурой Streptomyces lavendofuseus 3/2000, по сравнению с другими культурами рода Streptomyces, выделенными из почвы Латвийской ССР и выращенными в условиях,аналогичных примеру 1, отражена в табл.3. „, Та 3 Культзфа из рода Количество наStreptomyces, выкопленного КоА в ферментационделенная из почвы Латвийской ССР ной среде, мкг/мл (методом Каплана-Липма на)

$ 1117318

Таким образом, предлагаемый штаммвторную адсорбцию на колонках и элюиобладает способностью на среде срование, последующую лиофилиэацию

крахмалом в качестве источника угле-элюата с последующим растворением,

рода за 96 ч синтеэиров;ать коферментпреципитацией, адсорбцией на ионообКоА в количестве 12,9 мкг/кп (по Кап-5 менной смоле и повторной лиофилизалану-Липману) или 6,0 мкг/мп (поцией элюата. Полученный препарат

методу ацилтиокиназы), представляет собой белый порошок.

Таким образом, штамм Streptomyces

В дальнейшем препарат КоА вьще-lavendofuseus 3/2000 продуцирует

ляют из ферментационной среды по 12,9 мкг/мп КоА. Его использование

схеме, включающей следующее этапы:позволит создать отечественный препанагревание, центрифугирование, по-рат КоА.