Флуоресцентный краситель для микроорганизмов и растительных тканей Советский патент 1984 года по МПК G01N1/30 A61B10/00 G01N21/64 

11

Изобретение относится к микробиологическим исследованиям, а именно к использованию флуоресцентных красителей при исследовании микроорганизмов и растительных тканей.

Известны флуоресцентные красители для микроорганизмов и растительных тканей, обладающие сине-зеленой флуоресценцией. Одним из лучших красителей является 2-(4-аминофе нил)-5-(2-бензтиазолш1) бензтиазол(примулин) Cl З

Недостатком такого красителя являются его высокая рабочая концентрация (0,01-0,02 %) и узкий рабочий диапазон рН ( 7, так как при рН 7 появляются два вида флуоресценции за счет различной дисперсности частиц).

Известно вещество перхлорат пиримидо 1,2 - а бензимидазолия, которое описано в литературе в качестве химического реактива С2 7Целью изобретения является снижение рабочей концентрации раствора флуорохрома и расширение рабочего диапазона рН.

Цель достигается применением iiepxлоратов пиримидо С 2-aЗбeнзимидaзoлия в качестве флуоресцентного красителя для микроорганизмов и растительных тканей.

Пример . Пиримидо -аЗ бензимидазолий имеет структурную формулу

R

.. .

|| 1 / -4 р Г |Ч

R

Р R- СдН 19R -

R-CfiHs R-CHj Длярастительных тканей исцользуются соединение (I) и (II). Готовят препарат эпидермиса лука на , покровном стекле в к&пле воды, далее наносят 0,5- 1,0 мл 0,0025%-ного спиртового раствора соединения (I Через 5-IО мин раствор сливают, препарат промывают дистиллированной водой или 25%-ным этиловым спиртом. Микроскопируют в ультрафиолетовом . спектре. Ядро и оболочка дают яркую сине-зеленую флуоресцендию.

72

П р и м е р 2. Готовят препарат эпидермиса алое. Окрашивают при помощи соединения (II) в течение5-10 мин. Промывают дистилированной водой и Микроскопируют в ультрафиолетовом свете. Клеточные оболочки ядер и устьиц дают яркую си не-зеленую флуоресценцию (см.табл.1).

Интенсивность флуоресценции при окрашивании растительных тканей соединениями (I) и (II) перхлоратов пиримидо Cl,2-a3 бензимидазолия приведена в табл.1.

Как видно из табл.1, растительные

ткани окрашиваются в диапазоне концентраций красителя 0,0012 - 0,005%. При более высоких концентрациях красителя происходит выпадение его кристаллов.

П р и м е р 3. Для окрашивания микроорганизмов готовят мазки из культуры, сушат над пламенем горелки. Затем мазок заливают 0,5-1 мл 0,0025%-ного спиртового раствора соединения (I). Через 10 мин раствор красителя сливают, промывают дистилированной водой и Микроскопируют в ультрафиолетовом свете. Микробные клетки дают ярко-сине-зеленую флуоресценцию (см.табл. 2).

Интенсивность флуоресценции Penicillium sp при окрашивании соединениями (I) и (II) перхлоратов пиримидо l,2-aJ бензимидазолия приведена в табл. 2.

Окрашивание микроорганизмов и растительных клеток производится при различных рН красящих растворов, что не влияет на качество флуоресценции (рН от 3 до 9).

Таким образом, применение в качестве флуорохромой перхлоратов пиримидо р,2-а 1 бензимидазолия дает возможность окрашивания микроорганизмов и растительных клеток в более низких (в 4-6 раз по сравнению с прототипом) кбнцентрациях, а также проводить окраску в более широком диапазоне рН красящего раствора, что значительно расширяет область применения красителя. Кроме того, препараты, окрашенные данным красителем, при Хранении не утрачивают нтенсивность свечения.

Применение перхлоратов пирими/ до | ,2-а J бенэимидазолия в .качестве флуоресцентного красителя для микроорганизгюв и растительных тканей.