Способ получения митолектина (фитогемагглютинина) из семян фасоли Советский патент 1984 года по МПК A61K35/78 

00

ел

о ot Изобретение/относится к биологии в частности к получению биологически активного гликопротеида из семян фасоли, и может найти применение при проведении цито- и иммуногенетического анализа, в мембраноло гии, иммунологии. Известен способ получения митоле тина путем экстракцией муки фасоли разбавленной соляной кислотой,двухступенчатого высаливания сульфатом аммония с последующим диализом и очисткой ацетоном f 11 Однако известный способ не обеспечивает достаточной активности imjeлевого продукта и является длительным и трудоемким. Цель изобретения - повышение активности целевого продукта и сокращение времени его получения. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения мито лектина (фитогемаглютинина) из семян фасоли путем экстракции муки фа соли раствором соляной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммония, диализом очисткой экстракцию проводят-в присутствии 2 ммоль метабисульфита нат рия в течение 1ч, высаливание проводят сульфатом аммония с насыщение при парвом высаливании 40%, а последующую очистку проводят фильтрацией через сефадекс Г-100 в 10%-ном растворе хлористого натрия при рН7, Пример Семена фасоли Крас ноградская-15 урожая 1982 г. измел чали и просеивали через сито так, ч средний размер частиц муки был 250300 мкм. К 0,5 кг муки добавляли 2,5 л холодной дистиллированной води (все операции проводили при 4 С при перемешивании и рН смеси доводи концентрированной соляной кислотой 1(рН контролировали по покраснению бумажки универсального рН-индикатора Экстракцию проводили в присутствии 2ммоль антиоксиданта (метабисульфита натрия) 1 ч при постоянном пер мешивании. Смесь подвергали центрифугированию на центрифуге Кг-70 (ГДР) при 4000 об/мин 10 мин. К надосадочной жидкости добавляли растертый (для удаления крупных комков) кристаллический сульфат аммония марки ХЧ или ОСЧ в количестве 304 т в 1 л смеси при перемешивании. Через 1 ч смесь центрифугировали 2 ч при 4000 об/мин, осадок отбрасывали, а из надосадочной жидкости второй раз высаливали белок путем добавления измельченного сульфата аммония таким образом, чтобы конечная концентрация соли (с учетом первого добавления соли) составила 380 г в 1 л смеси (с учетом второго добавления соли). Через 1 ч перемешивания смесь центрифугировали 2 ч при 4000 об/мин (как и после первого высаливания белка), надосадочную жидкость отбрасывали, а осадок подвергали.диализу против дистиллированной воды (1:20 по объему, 3 смены воды) 48 ч. Смесь центрифугировали при 4000 об/мин 20 мин. осадок отбрасывали, а надосадочную жидкость доводили до рН 5,4. Вьшавший осадок удаляли центрифугированием 20 мин при 4000 об/мин, а к надосадочной жидкости добавляли бидистшшированную воду (1:10 по объему). Смесь сразу центрифугировали 1 ч при 4000 об/мин, полученный осадок растворяли в 10%-ном растворе поваренной соли с рН 7 (в объеме, равном 1 /20 объема колонки с сефадексом Г-100) и проводили гельфильтрацию через колонку с сефадексом Г-100 размером 3 см в диаметре и высотой 20 см. Первый выходящий с колонки митолектиновый пик собирали и лиофильно сушили. Выход митолектина (фитогемагглютинина) составил 1,45 г из 1 кг муки семян фасоли. Предлагаемый способ иллюстрируется табл. 1 и 2. Таким образом, предложенный способ позволяет повысить митогенетичесую активность целевого продукта и ократить времяего получения.

СоответствующееМитогенетическая

насыщение экст-активность целеракта сульфатомвого продукта,

аммония, %% РБТЛ

3570,1

/ 4080,2

Время,ч

2424

11

Таблица 1

Таблица 2

1-е высаливание| 2-е высаливание

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИТОЛЕКТИНА (ФИТОГЕМАГГЛНЛИНИНА) ИЗ СЕМЯН BS -J2rj 3i : ФАССЛИ путем экстракции муки фасоли раствором соляной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммония, диализом и очисткой, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени получения и повьппения активности целевого продукта, экстракцию проводят в присутствии 2 ммоль метабисульфи а натрия в течение 1 ч, высаливание . проводят сульфатом аммония с насьпцением при первом высаливании 40Z, а последуклцую очистку проводят фильтрацией че.рез сефадекс Г-100 в 10%-ном растворе хлористого натрия при рН 7,0.