Штамм микроскопического гриба @ @ 35219-продуцент фенолаз Советский патент 1985 года по МПК C12N9/02 C12N1/14 C12R1/645 

65 :п

4

:0 1 Изобретение OTHOCIJTCH к микробиологической промышленности, представляет собой новьй штамм, используемьй для получения фермента - фе нолазы, который может быть примёнен для интенсификации технологичёЬкйх процессов гфи переработке чая в производстве сухих и жидких концент тратоБ чая,. Способностью биосинтеза фенолаз обладают многие микроскопические грибы. Однако они в основном катали зируют реакции гидроксилировання мо нофенолов и окисления п-фенолов, не катализируя окисление о дифенолов. Предлагаемый штамм Mycelia steri iia МБР 35219 был выделен из микро 4шоры чайного растения. , Данный штамм характеризуется аспорогенностью при выращиван1ет на агаризованных средах и при глубинно культивировании, что исключает возмоншость загрязнения среды его спор ми. Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики. Растет хорошо на средах: Чапека, Сабуро, чайнсм, картофельно глюкозном и сусло-агаре,а также на естественных питательных субстратах На чайном агаре хорошо развивае ся воздузикый мицелий серовато-белого цвета, рыхло-войлочньй, высоко поднимающийся на поверхность среды. Центр колоний не рыхльй, приземистый. Строма не окрашена, гифы трех типов: толстые - до tO мкм, густо гранулированные утолщенные - до 5 мкм, слегка гранулированные} тонкие с мелкими каплями жира и митохроматина. Хламидоспоры отсутствуют линейный рост колоний на сусло-агар по дням: 3-й день - 29 мм, 5-й день - 48 мм, 7-й день - 72 мм, 10-й день - 91,5 мм. Отношение к углеводам: лучше все усваивает глюкозу, сахарозу, крахмал, в меньшей степени фруктозу и лактозу. Из источников азота хорошо усваивает аммонийные соли 492 (NH)SO и (NH4).,HPO Биосинтезу фенолаз способствуют ионы микроэлементов меди и молибдена. Штамм хорошо растет в широких пределах рН - от 3,5 до 6,8. Оптимальной температурой роста является С. Пример. Для получения фенолаз используется водно-минеральная среда с чайным экстрактом в качестве индуктора. Посевным материалом служит 48-часовая культура штамма, выращенная глубинным способом, на среде следующего состава,%: глюкоза 3, (NH),jSO,, 0,5; 0,25; KHjPO. 0,5; дрожжевой экстракт 1,0j Си50ц-5Н О 0,27, ( 0,009. Культивирование происходит при 281 2 ° С на качалке, делающей 210 об/мин. Питательной средой для ферментации служит среда следующего состава,%: глюкоза 5, (NH) SQ 0,5, MgS04-7H,jO 0,25; KHjPO 1,0; чайный экстракт 0,2; , 0,27; (NH) 0,009. Культиви- рование проводят в тех же условиях в течение 42 ч. Активность биосинтезируемой фёнолазы определяют следующим образом. Реакционная смесь содержит 0,25 МП фермента, 0,25 мл дистиллированной воды, 0,07 М пирогалоЛл или 0,2%-ный чайньгй танин в 2 мл 0,1 М цитрат-фосфатного буфера рН 5,8. Смесь инкубируют на термостатируемой качалке (100 об/мин) в течение 1 ч. Через 1 ч снимают спектр поглощения образовавшегося .окисленного субстрата, экстрагированного п-бутанолом при 430 нм длине Волны. Активность фенолазы выражают в условных единицах (изменение спектра поглощения на 0,001 за 1 мин). Активность продуцируемой штаммой Mycelia sterilia ИБР 35219 фенолазы равняется от 100 до 170 ftЕ на 1 мг белка.

Штамм микроскопического гриба Mycelia sterilia ИБР 35219 (коллекция Центрального Музея промьшшенных микроорганизмов института ВНИИгенетика коллекционный номер ЦМПМ F-236) - продуцент фенолаз. СО