Штамм гриба РеNIсILLIUм caNeSceNS продуцент @ -фруктофуранозидазы Советский патент 1992 года по МПК C12N9/26 C12N9/14 

Изобретение относится к ферментной промышленности, в частности к получению нового штамма, продуцента фермента ft- фруктофуранозидазы. используемой в пищевой промышленности и сельском хозяйстве.

Цель изобретения - получение штамма с более высокой активностью/ -фруктофура- нозидазы.

Для получения высокоактивного штамма был использован штамм Penicillium canescens Sopp. 20171 (с активностью 7.0 ед/мл), который обработан ультрафиолетовыми лучами в дозе 200 Дж/м .

Штамм депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика. коллекционный номер ВКПМ F-418.

Морфологические признаки. Штамм атоксичен, быстрорастущий, характеризуется умеренным спороношен.ием. Образование конидий начинается на один день

позже, чем в исходной культуре. Конидии 2.2-2.5 мкм, яйцевидные, потом шарог.ид- ные. шероховатые, в цепочках соединяющиеся в колонке, но потом более или менее растопыренные при старении. Колом.-.и на агаризованном сусле, агаризованной среде Чапека, агаризованной среде с сахарозой пушистые, состоящие из плотного баз.чль- ного войлочного и рыхлого сплетения иоз- душного мицелия со слабо выраженной радиальнобороздчатостью с обильным спо- роношением. превосходящим исходную культуру по урожайности спор на 10-15%. Колонии с растущим краем 2-3 мм ширины.

VI

О

со о

00

о

белые до бледно-серого цвета, затем при старении дымчато-серые. Конидиеносцы отходят от субстрата до 350-500 х 3-3,5 мкм или как короткие веточки воздушных спор с разнообразно расположенными растопыренными 1,2-3 мутовчатыми структурами с метулями обычно около 10-20 х 2, мкм, несущими стеригмы 8 х. 2,3 мкм с четкой конидиеносной шейкой, узкой, но сравнительно короткой.

Культуральные признаки. На агаризо- ванных искусственных средах (сусло-агар, картофельно-глюкозный агар, картофельный агар) и синтетических агаризованных средах (средах Чапека, Сабуро, Ролена-То- ма, агаризованной среде с сахарозой) штамм растет хорошо.

Линейный рост колоний штамма на агаризованных средах по дням: сусло-агаровой среде 5-й день 35-48 мм: 10-й день - до 85 мм; среда Чапека - 5-й день 30 мм: 10-й день 40 мм; агаризованная среда с лактозой - 5-й день 28-40 мм; 10-й день до 70 мм.

На отрубях в условиях твердо-фазной ферментации штамм растет хорошо.

Отношение к углеродному питанию. Хо- рои.. усваивает моносахариды: глюкозу, арабинозу, сахароспирты: сорбит, манит, дульцит, из дисахаридов: лактозу, сахарозу, мальтозу, а также крахмал и инулин.

Отношение к азотному питанию: усваивает нитратный азот, лучше аммонийный. Из органических источников азота ассимилирует пептон, мочевину, дрожжевой авто- лизат, кукурузный экстракт.

Отношение к кислороду: облигатный аэроб.

Отношение к температуре: мезофил, оптимальная температура для роста и биосинтетической активности 26-27°С.

Отношение к кислотности питательной среды: растет в широких пределах рН от 2,0-9,0.

Для размножения штамма применяли модифицированную среду Чапека с сахарозой следующего состава, %: сахароза 3,0; ЫЩМОз 0,2; КН2Р04 0,1, MgS04 0,05; KCI 0,05; кукурузный экстракт 0,05, агар 2, исходное рН 5,8-6,0.

Питательной средой для ферментации служит среда следующего состава, %: соевая мука 3,0; Na2HP04 12H20 15; (NH4)2S04 0,2; KCI 0,05, MgS04 0.015, исходное рН 4,1- 4,2.

Проверкой, проведенной в течение четырех лет, установлено, что при хранении в

пересевах уровень ферментативной активности Penicillium canescens АМЭ-85 не снижается.

Продуцент образует богатую белком би- омассу (до 30% от массы сухой биомассы).

Штамм Penicillium canescens АМЭ-85 поддерживают на агаризованной среде с сахарозой, мас.%: сахароза 3,0; МЩМОз 0,2, КН2Р04 0,1; KCI 0,1; MgS04 0,05, кукурузный экстракт 0,05; агар 2. Исходное рН среды 6,0.

Глубинное культивирование гриба проводят на жидкой питательной среде следующего состава, мас.%: соевая мука 3,0:

Na2HP04 12H20 1,5; ( 0,2; KCI 0,05; MgS04 0,015; исходное рН 4,2.

Культивирование проводят в колбах емкостью 750 мл на термостатированной качалке, делающей 220 об/мин (уровень

аэрации 1,4 02/лч) при 30°С в течение 72 ч. Объем питательной среды в колбах составляет 100 мл. Засев питательной ср Эды производят 2%-ной суспензией конидий поверхностной культуры гриба, выращенной в

пробирках на скошенном сахарозном агаре в течение 12 дней при 28°С.

Биомассу отделяют фильтрованием и в фильтрате определяют активность / -фрук- тофуранозидазы по методу Самоджи-Нельсон. Реакционную смесь, состоящую из

0,7 мл субстрата. 0,5 мл 0,2 М ацетатного

буфера рН 4,5, 0,3 мл раствора фермента,

инкубируют при 50°С в течение 15 мин,

затем добавляют 1 мл реактива Самоджи и

кипятят на водяной бане в течение 20 мин. После охлаждения добавляют 1 мл реактива Нельсона, доводят водой до 5 мл и фотомет- рируют при 590 нм. Активность /3 -фруктофу- ранозидазы составляет 80 ед./мл (известной

57 ед./мл).

В фильтрате кроме активности/9-фрук- тофуранозидазы содержатся а-галактозида- за (3,5 ед./мл),/ -галактозидаза (20 ед./мл) и ксиланаза (5 ед./мл).

Полученный фильтрат подвергают разделению и выделяют/ -фруктофуранозида- зу как отдельную фракцию, в которой определяют активность.

Активность очищенной / -фруктофуранозидазы составляет 240 ед./мл.

Формула изобретения Штамм гриба Penicillium canescens ВКПМ F-418 - продуцент /3-фруктофурано- зидазы.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению нового штамма-продуцента /3-фруктофуранозидазы. используемой в пищевой промышленности и сельском хозяйстве. Цель изобретения - получение штамма /3-фруктофуранозидазы с более высокой активностью. Штамм Penicillium canescens ВКПМ F-418 получен путем обработки исходного штамма ультрафиолетом, депонирован в Центральном музее промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика. При глубинном культивировании на среде, содержащей соевую муку и минеральные соли, штамм продуцирует/5-фруктофуранозида- зу с активностью 80 ед/мл (72 ч). Активность очищенного фермента 240 ед/мл. Помимо /3-фруктофуранозидазы продуцент синтезирует/3-галактозидазу 20ед./мл бг-галакто- зидазу - 3.5 ед./мл. ксиланазу - 5 ед./мл. (Л С