Способ получения иммуносорбента Советский патент 1985 года по МПК A61K47/00 

9) СО СП

Изобретение относится к области s едицины, преимущественно к иммуноогии, и может быть использовано ля приготовления иммунологических репаратов в паразитологии.

Целью изобретения является увеичение специфической емкости сорбента и упрощение способа.

Пример 1. Очистка сыворотки кролика, иммунизированьгого цельной жидкостью ларвоцист эхинококка, от антител к белкам хозяина барана) К 4 г снлохрома с d 200 нм прили- вшот 48 мл 5%-ного-раствора -амино-пропилтриэтоксисилана в воде. Смесь нагревают при 90°С в течение 4 ч. 1 промыто1чу водой и высушенному при аминосилохрому добавляют 60 мл 2,5%-ного раствора глутарового аль ;j,ei-ii,u,a в воде и обрабатывают при комнатной текпературе в течение 3ч, После промывки сорбент ннкубирзтот с 30 мл нормальной бараньей сыворот ки с коице1 тр.1цией белка 75 мг/мл при в течение 17 ч..

По окончании обработки сыворотку сливают, сорбент тщатачьно промывают забуференным 0,1 М фосфатным буфером физиологическим раствором рН 7,4, содержащим 0,02 твина 20. К иммуно сорбенту добавляют 150 мп сыворотки кролика, иммунизированного цельной жидкостью ларвоцист эхинококка барана.Смесь инкубир шт прп комнатной температуре в течение 3 ч при посто ЯННОМ HepeMeniHBaHrai. Истощенную антисыворотку сливают и проводят иммунохимический анализ на полноту истощения антител к белкам хозяина, Имму- носорбент промывают забуференным физиологическим раствором и элюиругот . антитела 10 мл 0,1 М раствора глиЦЫН-ИС1 буфера рИ 2,2, Эгаощш проводят три раза по 3 мин.

Выход антител с сорбента составил 350 мг, Антисыворотка, истощенная, от антител к хозяину паразита, была использована для характеристики ал- тигенш гх препаратов паразита (эхирю- кокка) и д.пя оценки пригодности зритродрггарного диагностикума.

Пример 2, Вьиеление специфических антител к антигенам пара- зита из кроличьей антисыворотки про-тив шадкости ларвоцист эхинококка, К 4 г сшюхрома с d 200 нм, обработанного -аминопропилтризтоксисила- ном и глутаровым альдегидом так.

как в нримере 1, приливают 30 мп разм веденного лиофилизата эхинококковой .яшдкости (от барана) с концентрацией 10 МГ/14Л. Смесь инкубируют

при 4 С в течение 17 ч. По окончании обработки надосадочный белковый раствор сливают, сорбент промывают также, как в примере 1. К иммуносор- бенту добавляют 30 мл кроличьей антисьшоротки против жидкости ларвоцист эхинококка, очищенной от антител к хозяину паразита, и инкубируют .при комна.тной температуре в течение 4 ч при перемешивании. Истощенную антисыворотку сливают, промывку нг муно- сорбента и элюцию антител проводят также, как в примере 1,

Иммунохимический анализ истощен- . ной антисыворотки показал отсутст-

0 вне в ней антител к а1ггигенам паразита. Выход антител с. сорбента составил 45 мг, Вьщеленные антитела были использованы для иммунохикичес- кого анализа антигенньтх . препаратов

5 и для получения эритроцитарного антительного диагностикума.

Пример 3. Очистка сыворотки кролика, иммунизированного цельным экстрактом ларвоцист альвео-

0 кокка, от антител к белкам хозяина (хлопковой крысы), К 4 г силохрома . с d 100 нм, обработанного у-аминопропилтриэтоксисиланом и глутаровым альдегидом так, как в примере 1, приливают 40 мл нормальной сыворотки хлопковой крысы с концентрацией белка 70 мг/мл и инкубируют при 4 С в те гение 17 ч, К отм-ггому также, как в примере 1, иммуносорбенту приливают 80 мл сыворотки кролика, иммунизированного цельным экстрактом ларвоцист альвеококка. Смесь инкз- бируют при комнатной температуре в течение 3,5 ч при постоянном перемешивании. Истощенную сыворотку сливают и -нроводят Иммунохимический анализ на полноту истощения антител. Промывку иммуносорбента и этоцто антител проводят так, как в примере 1,

0 Выход антител с сорбента составил Ш6 мг, Иммунохимический анализ истощенной антисыворотки показал, что в ней присутствуют антитела к белкам хозяина паразита. После повторной 5 очистки антисыворотки на иммуносорбенте она бьша использована длл характеристики антигенных препаратов паразита (альвеококка).

Пример 4, Выделение специфических антител к антигенам пара- зита из-кроличьей антисыворотки про- тив экстракта ларвоцист альвеококка. К 4 г силохрома с d 190 нм, обработанного -аминопропилтриэтоксисиланом и глутаровым альдегидом так, как в примере 1, приливают 54 мл экстракта ларвоцист альвеококка с кон- центрацией белка 20 мг/мл. Смесь инкубируют прл С в течение 17 ч. К отмытому так, как в примере 1, имму- носорбенту приливают 48 мл очищенной от антител к хозяину паразита анти- сыворотки против экстракта ларвоцнст альвеококка и инкубируют при комнатной температуре в течение 4 ч при перемепшвании. Истощенную антисыворотку сливают, промывку иммуносорбента и элйцию антител проводят также, как в примере 1.

Выход антител с сорбента составил 42 мг. Нммунохимический анализ liCTO- ценной антисьшоротки показал отсутствие в ней антител к антигенам паразита. Выделенные антитела бьши использоваиы для получения эритроцитарного антительного диагностикума.

Применение силохрома со средним диаметром пор от 100 до 200 нм в качестве основы обеспечивает большую емкость иммуносорбента в конкретных иммунологических системах. Использование воды вместо толуола на стадии амииирования силохрома jf -аминопропйлтриэтоксисиданом упрощает способ и делает его неогнеопасным.

Полученньй иммуносорбент может быть эффективно использован для вьгделения специфических антител к антигенам паразита и для препаративной очистки антисыворотки. Выделенные антитела могут быть применены для приготовления антительных эритроци-

тарных диагностикумов и в иммунохи- М1ческих исследованиях. Очищенные от антител к белкам хозяина анти- сыворотки могут быть использованы для характеристики антигенных пре-

паратов и для оценки пригодности эритроцитарных диагностикумов,

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСОРВЕКТА путем аминирования силохрома К-аминопропилтриэтоксисиланом с последующей обработкой аминоскло- хрома глутаровым альдегидом и кона- лентным присоединением белков, о т- личающийся тем, что, с целью увеличения специфической емкости сорбента и упрощения -способа, используют силохром с диаметром пор от 100 до 200 нм и реакцию аминирования проводят в водной среде. 2.Способ по п. 1, отличающий с я тем, что в качестве белков используют белки сыворотки крови. 3.Способ по п. 1, отличающий с и тем, что в качестве белков используют белки жидкости ларво- иист эхинококка. / 4.Способ по п. 1, о.т личаi ющийся тем, что в качестве бел (Л ков используют белки экстракта лар- воцист апьвеококка.