Способ получения иммуносорбента Советский патент 1979 года по МПК A61K47/00 

1

Изобретение относится к биохими и может быть использовано для выделения анти1ел, применяемых в качествеЛечебных препаратов и аналитических реагентов в медицинской диагностке, эпидемиологии и микробиологии.

Известен способ получения иммуносорбента путем обработки неорганического производного кремния у-с1минопропилтриэтоксисиланом с последующим проведением химической модификации полученного комплекса ковалентным связыванием его с белком 11. Однако известный способ является трудоемким и не обеспечивает большой емкости сорбента.

Для упрощения способа и увеличения емкости сорбента в качестве неорганического производного кремния используют силохром, химическую модификацию проводят глутаровым альдегидом, а ковалентное связывание белка ведут в присутствии тритона Х-100.

При осуществлении способа в качестве неорганического производного кремния используют силохром.

Силохром обрабатывают 7 амино/1ропилтризтоксисиланом и затем

раствором глутарового альдегида, в концентрации 2,5-1%. Моди4 1цир6ванный таким образом носитель вводят в реакцию с раствором антигена или антитела в присутствии тритона. На 1 г носителя лучше использовать 25-100 мг белка с концентрацией 2,5-10 мг/мл в буфере с рН 5-7, содержащем 0,025-0,1% тритона Х-100.

Емкость полученного иммуносорбента составляет 20-30 мг антител на 1 г носителя, что в 3-5 раз превышает емкость известных носителей на основе соеданений кремния.

П РИМ ер IT Выделение а:нтител к 3gr6 человека из кроличьей антисыворотки. 1 г силохрома кипятят в 5 мл 2%-ного раствора Т-аминопропилтриэтоксисилана в толуоле 10 ч. К промятому толуолом, высушенному при силохрому добавляют 10 МП 1%-иог лутарового альдегида в воде и помещают на 3 ч в ледяную баню. Затем образец отмывают холодной водой от избытка глутарового альдегида я инкубируют с 4 мл pac TBOpaJg-G человека, содержащем 20 мг/мл белка, в течение 3 ч в 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,0 с

0,025% тритона. Несвяэавшийся белок отмывают этим же буфером, добавляют кролика против человека, инкубируют 3 ч и опять ofMtiSseoT Несвяэавшийся белок. ЭлюЦию антител проводят в колонке раствором 3 М NaCNS (20 мл 3 М MoCNS

6518144

на 0,25 х 4 см, содержащую 1 г силохрома). Определение содержания антител проводят по методу Гурвича {используя иммуносорбент на основе агарового геля), общее содержание белка определяют спектро5 фотометрически (см. табл.).