Способ подготовки биопсийного архивного материала из парафиновых блоков для электронно-микроскопического анализа Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

о

ел

со го tc

Изобретение -относится к медицине в частности к патологической анатомии, эмбриологии и гистологии, и мажет найти применение в практической медицине и биологии.

Цель изобретения - улучшение сохранности ультраструктур тканей.

Пример 1. Проводят изучение ультраструктуры плаценты женш,ины с эклампсией и плаценты женщины с нефропатией П. Парафиновые блоки хранились в течение 1,5 лет Из них после просмотра контрольных.срезов, окрашенных гематоксилин-эозином, вырезают интересуюш,ие участки около IX 1 мм и проводят через 2 смены ксилола по 2 ч. После этого проводят через 2 смены абсолютного этанола по 25 мин в 2 сменах 96%-ного этанола по 15 мин, в 2 сменах 70%-ногЬ этанола по 15 мин, промывают дважды 10%-вой сахарозой по 15 мин, дофиксируют 2,5%-ным раствором глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2, промывают указанным раствором сахарозы, осмйруют 1%-ным раствором ОзО4 на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2 60 мин при комнатной температуре, вновь промывают указанным раствором сахарозы, обезвоживают в этаноле 70%-ном, 96%-ном, 100%ном) и 2 раза в абсолютном ацетоне по 15 мин, заливают в эпоксидную смолу как обычно.

При этом удается получить картину практически идентичную картине до заливки образца в парафиновые блоки, присуш,ую плаценте при данной патологии.

Пример 2. Проводят изучение тех же образцов плаценты, что и в, примере 1. Однако для промывки используют 8%-ную сахарозу (10 мин). Осмйруют 0,9°/о-ным О,О., 55 мин. После просмотра в электронный микроскоп получают результаты, аналогичные примеру 1.

Пример 3. Проводят изучение тех же образцов плаценты, что и в примерах 1 и 2.

Однако для осмирования используют 0,7%ный раствор и 2%-ный раствор глутаральдегида. Во время просмотра в электронный микроскоп не удается получить сохранившихся участков для изучения патологии и получения фотографий.

Пример 4. (сравнительный). Для сравнения предлагаемого способа с известным кусочки тех же плацент проводят по известному способу. После депарафинизации

ксилолом и проведения через 2 смены 100%-ного этанола кусочки фиксируют в 2%-ном водном растворе 0564 в течение 2 ч при комнатной температуре, после чего обезвоживают и заливают в эпоксидную смолу как обычно. Полученные результаты не позволяют в полной мере изучить образцы и получить хорошие микрофотографии Изучение ультраструктуры образцов ткани, подготовленных по предлагаемому способу (примеры 1 и 2), показывает ее хорошую сохранность и идентичность ультраструктуре на микрофотографиях образца ткани плаценты, который готовится по известному способу для электронно-микроскопического анализа до закладки ткани на хранение в архив (свежий биоптат).

Таким образом, использованная концентрация сахарозы для промывки (8-10%-ная является оптимальной. При меньших концентрациях наблюдается гидратация тканей, а при больших - сморщивание, что в том и другом случаях приводит к нарушениям сохранности тканевых структур. При концентрации глутаральдегида меньше 2,4% возможна недофиксация объекта, а выше 2,5% приводит к неоднородной фиксации ткани.

Использование растворов четырехокиси осмия выше и ниже выбранных границ концентраций не приводит к хорошей сохранности ультраструктур.

СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОПСЙЙНОГО АРХИВНОГО МАТЕРИАЛА ИЗ ПАРАФИНОВЫХ БЛОКОВ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОГО АНАЛИЗА, включающий депарафинизацию ксилолом или толуолом, проведение через серию растворов этанола понижающейся концентрации, осмирование, обезвоживание и заливку в эпоксидные смолы, отличающийся тем, что, с целью улучшения сохранности ультраструктур тканей, проведение материала через этанол осуществляют последовательно в 100%-ном растворе спирта 25-30 мин, в 96%-ном 10-15 мин, в 70%-ном 10-15 мин, дважды промывают материал в 8-10%-ном растворе сахарозы в течение IQ-15 мин, затем помещают материал в 2,4-2,5%-ный раствор глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2, повторно промывают раствором сахарозы, осмйруют в 0,9-1,1%-ном растворе четырехокиси осмия на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2 55-60 мин, вновь промывают указанным раствором сахарозы, а затем обезвоживание производят в укаS занных растворах этанола с повышением концентрации и в двух сменах абсолютно(Л го ацетона по 15 мин.