Способ подготовки биологической ткани к исследованию в растровой микроскопии Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

О5 00 00 Изобретение относится к биологии и медицине и предназначено для подготовки биологических объектов к исследованию на растровом электронном микроскопе (РЭМ). Цель изобретения - выярление всех структур поверхности. Способ осуществляется следующим образом. Образец ткани фиксируют по принятому в электронной микроскопии методу, отмывают от фиксатора и на 1-2 ч при комнатной температуре погружают в 0,5-2%-ный раствор хлорида олов в 1%-ной кислоте (d 1., 18), служащий сенсибилизатором поверхности, и 15-20 мин промывают в дистиллированной воде для создания коллоидной пленки двухвалентного олова (SnCl + H,jO Sn(OH)Cl + HCl, повьппающей равномерность образования металлического покрытия и создающей условия для восстановления ионов металла. Затем на 1-2 ч переносят препарат в 0,5-2%-ньм раствор хлорида драгоценного металла, например золота (SnCl,, + AuClj - причем образующееся при згтом металлическое покрытие и ионы металла, откладывающиеся внутри ткани, обеспечивают злектропровЬдность образца по всей его толщине и на поверхности, что препятствует возникновению ючагов статического электричества; отмывают препарат в дистиллированной воде, обезвоживают одним из спо собов, применяющихся в электронной микроскопии, и изучают на растровом электронном микроскопе. .Пример. Предназначенный для исследования фрагмент ткани, например, поджелудочной железы или печейи промывают для очистки поверхности от загрязняющих веществ и фиксируют в 1-3%-ном растворе глутарового альдегида в 0,1М фосфатном буфере. Затем его отмывают забуференним изотоническим раствором хлористого натрия и для окончательной фиксации переносят в 1%-ный раствор четырехокиси осмия в О,1 М фосфтаном буфере. Вновь тщательно отмывают в дистиллированной воде. Фиксированную ткань на 1-2 ч погружают в 1%-ньй раствор хлорида олова в 1%-ной соляной кислоте, в течение 15-20 мин отмывают в дистиллированной воде, на 1-2 ч помещают в 1%-ный раствор хлорида золота и вновь 1520 мин отмывают в дистиллированной воде. После этого подготовленньм таким образом препарат обезвоживают в спиртах восходящей крепости от 30 до 100°С, наклеивают его на подложку и изучают на растровом электронном микроскопе. Опытным путем установлено, что если концентрация хлорида олова или хлорида золота в растворе менее 0,5%, препарат свойств злектропроводности не приобретает, а при концентрации более 2% возникают искажения изображения. Изобретение позволяет выявить все структуры поверхности ткани, повысить разрешающую способность микроскопа, кроме того, исключить использование чистых драгоценных металлов и специальной вакуумной аппаратуры.

СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ К ИССЛЕДОВАНИЮ В РАСТРОВОЙ МИКРОСКОПИИ,путем ее фиксации, обезвоживания с последующей обработкой драгоценным металлом, отличающийся тем, ЧТО, с целью вьщеления всех структур поверхности, ткань послефиксации обрабатывают 0,5-2%-ным раствором хлорвда олова, а обработку драгоценным металлом проводят в 0,5-2%-ном растворе хлорида золота, при ЭТОМ каждую обработку ведут в течение 1-2 ч. (Л