Микрорефрактометрический способ определения числа живых и мертвых клеток Советский патент 1958 года по МПК C12Q1/06 G01N21/71 G01N21/01 

Изобретением является способ подсчета живых и мертвых микробных клеток, основанный на применении аноптральной (усовершенствованной фазово-контрастной) микроскопии при исследовании материала при производстве бактерийных препаратов.

Для этого исследуемый материал погружается в иммерсионную среду, которой является очищенный гель желатины- Показатель преломления среды должен быть равным показателю прелоМиТения протоплазмы живых клеток, при этом мертвые микробные клетки видны в виде сплошных ярко светящихся тел, а живые - в виде темных тел, окаймленных ярко светящимся ободком.

Способ осуществляется следующим образом.

Сухая очищенная желатина погружается в слабощелочную дистиллированную воду на несколько часов до полного набухания желатины. Затем, осторожно подог ревая, желатину растворяют, а для просветления ее к раствору добавляк т яичный белок, и кипятят массу 10 мин.; образовавшиеся хлопья удаляют фильтрацией или центрофугированием расплавленной массы.

После установления нейтральной реакции просветленную и очищенную расплавленную желатияу разливают по пробиркам и стерилизуют дробно текучим паром.

Для приготовления препарата расплавленную желатиновую массу наносят слоем в 0,2 льи на предметное стекло. Сразу же после застывания желатины на ее еще влажную поверхность наносят капельку исследуемой микробной взвеси и сверху, избегая образования пузырьков воздуха, накладывают покровное стекло.

Капиллярное присасывание покровного стекла к поверхности желатины способствует равномерному распределению материала по ее поверхности.

КаждоАму виду микробов соответствует своя концентрация геля желатины. Кроме того, различные сорта желатины могут дать небольшое отклонение концентрации, что требует коррекции, устанавливаемой опытным нутем.

При рассматривании в анонтральном микроскопе препаратов, приготовленных по данному способу и содерл ащих живые и мертвые клетки, иммергированные в желатиновом геле соответствующей концентрации, на светлркоричневом фоне препарата видны ярко светящиеся мертвые клетки и лшвые клетки в виде «пустот, окаймленных яркосветящимся тонким ободком.

Предмет изобретения

Микрорефрактометрический сиособ определения числа живых и мертвых клеток, отличающийся тем, что, с целью точного определения числа живых и мертвых клеток при исследовании живых вакцин, сухих бактериальных культур и при изучении влияния различных агеи- , .11гспособность микроорганизмов, исследуемый материал подi : ;:; рсскспии С использованием в качестве иммерc..G...iLH среды желати1;ового гелк, приготовленного в такой-концентрации, чтобы его показатель преломления был равен показателю преломления протоплазмы живых клеток.