Способ активации лимфоцитов Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

-4

СО

о

mdk

S5. )Изобретенке относится к медицине в частности к иммунологии. Целью изобретения является повышение специфичности стимуляции лимф цитов путем использования плазминогена в дозе 5-100 мкг/мл культуры клеток. . . J3no,CQ.6 I шшрстрируется следующими приме рами. : . П р и м е р 1, Исследование мйто ||.енной активности стимуляторов в культуре лимфоцитов селезенки мышей Исходной клеточной популяцией яв ляется популяция клеток селезенки 6-8-недельных мышей С57В1. Вьщеление мононуклеарных клеток (лимфоцит и моноциты из селезенки мышей проводят путем центрифугирования отфильтрованного через нейлоновую.сеточку гомогената на верографин-фико ле с плотностью 1,087 г/см при 400 g в течение 30 мин. Клетки (5 -10 мл инкубируют при в 1 мл среды RPMI-1640, дополненной 2 ммоль Z-глютамина, 310 моль 2-меркаптоэтанола, 100 ед/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина. К I мл клеточной суспензии добав ляют 5-10 мкл растворов стимуляторо разведенных в среде RPMI-1640 Д1 мг/мл). В качестве контроля служат клетки, к которым добавляют 5-100 мкл среды RPMI-1640. За 16 ч до конца культивирования в культуры вводят 2,0 мкКи Н-тимидина (удельная активность 20,6 мкКи/моль). Через после начала культивирования клетки обрабатывают холодной. 5%-ной трихлоруксусной кислотой и нерастворимую фракцию (ДНК ) собираю на мембранных фильтрах. Количество включенного в ДНК Н - тимидина определяют с использованием толуольного сцин тиллятора же - 106 на счетчике СБС-2. Количественные данные о включени Н-тимидина в ДНК лимфоцитов представляют собой среднее арифметическое измерений,в пяти параллельных куо1ьтурах и выражают в импульсах в минуту на 5.-10 клеток. Данные пред стапляны в табл. 1. 16 280+15,3 Контроль П р и и е р 2. Исследование митогенной активности глу-плазминогена в культуре лимфоцитов периферической крови человека. Исходной клеточной популяцией является популяция клеток периферической крови- человека. Дефибринизацто осуществляют при перемешивании 12 мл крови в пробирке, содержащей 25 стеклянных бусин диаметром- 2-4 htM, Дефибринированную кровь смешивают с равньм об.ъемом среды RPMI-1640, 6-8 мл этой смеси наносят на поверхность 3 мл верографин-фикола в пробирках с внутренним диаметром 12-14 мм и центрифугируют при комнатной температуре 30 мин при 400 g. После центрифугирования клетки крови разделяют на- две. фракции: белый слой, состоящий из мононуклеарньЕХ клеток на поверхности, и фракцию, содержащую эритроциты и гранулоциты на дне пробирки. Мононуклеарные клетки собирают пипеткой. Клетки ( Л О м.п ) инкубируют при в 1 мл среды RPMI-1640, дополненной 2 ммоль Z-глютамина, моль 2-меркаптоэтанола, 100 ед/мл пенициллина и 10 мг/мл стрептомицина. К 1 мл клеточной суспензии добавляют 5-100 мкй раствора глу-плазминогена, разведенного на среде RPMI-1640 (1 мг/мл). В качестве контроля служат клетки, к которым добавляют 5-100 мкл среды RPMI-1640. За 4 ч до конца культивирования в культуры вводят 2,0 мкКи Н-тимидина (удельная активность 20,6 мКи/моль). Через 72 ч после начала культивирования клетки обрабатывают так же, как и в примере 1.

Количественные данные о включении Н-тимидина в ДНК лимфоцитов представляют собой среднее арифметическое измерений в пяти параллельных культурах и выражеШ) в импульсах в минуту на ЬЮ клеток. Данные представлены в табл. 2.

Таблица 2

Продолжение .2

Предлагаемый способ обеспечивает расширение арсенала веществ для активации лимфоцитов за счет свойствеи.ных организму веществ. Это в свою очередь расширяет возможности изучения механизмов активации лимфоцитов, их функциональной характеристики у больных для оценки состояния и резервов иммунных реакций организма .

СПОСОБ АКТИВАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ путем вьщеления и культивирования мононуклеарных лейкоцитов с последующим внесением в среду культивирования активатора, отличающийся тем, что, с целью повьшения специфичности стимуляции, в качестве активатора используют плазминоген в дозе 5-100 мкг/мл культуры клеток, § (Л с