Способ экспресс-диагностики инфекции @ @ Советский патент 1985 года по МПК A61B10/00 G01N33/53 

ел

4

N

Изобретение относится к областн медицины и может быть использовано для лабораторной диагностики микоплазменных пневмоний.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа диагностики.

Способ осуществляется следующим образом.

Сыворотки крови больных острыми пневмониями собирают в острый период заболевания. Реакцию ВИЭФ ставят на гель-электрофоретическом приборе фирмы «Реанал, модель 73. Готовят 1°/о-ный агаровой гель фирмы «Дифко на мединал-ацетатном буфере (рН 8,6). В агаре вырезают 2 ряда лунок. В ряд лунок, расположенных к аноду, вносят по одной капле испытуемой сыворотки больного, взятой в различных двукратных разведениях (от 1:2 до 1:64). Лунки находящиеся около катода, заполняют гликопротеидной фракцией антигена М. pneumoniae, которую получают путем химической экстракции антигена ледяной уксусной кислоты и этанолом.

Процедура получения гликопротеидной фракции заключается в следующем. Подвергнутый ультразвуковой дезинтеграции концентрированный антиген М. pneumoniae обрабатывают ледяной уксусной кислотой до получения рН среды 6,0. Выпавший осадок отделяют центрифугированием и в надосадочную жидкость снова добавляют ледяную уксусную кислоту до рН среды 5,0. Через 15-20 мин сформировавщийся осадок собирают путем центрифугирования при 18000 об/мин в течение 30 мин. Полученный

осадок растворяют в небольшом объеме физиологического буферного раствора (рН 7,2) и подвергают диализу в течение 3 дней в проточной и дистиллированной воде на холоду. Таким образом, приготовлена гликопротеидная фракция 1 антигена М. pneumoniae. Надосадочную жидкость, полученную после экстракции гликопротеидной фракции 1, обрабатывают 6-кратным объемом эталона на холоду (-|-4°С) и через 12-18ч

образовавшийся осадок отделяют путем центрифугирования. Осадок подвергают диализу как описано, и полученный материал представляет собой гликопротеидную фракцию 2 антигена М. pneumoniae. Полученные

j таким образом гликопротеидные фракции используют в реакции ВИЭФ в концентрации 120-200 мкг/мл углеводов и 70- 120 мкг/мл белка.

В качестве положительного контроля реакции ВИЭФ используют лунки, содержащие

0 гликопротеидную фракцию антигена и гипериммунную сыворотку и М. pneuinoniae. В качестве отрицательного контроля используют 2 пары лунок, содержащих гликопротеидную фракцию антигена и нормальную

5 кроличью сыворотку, а также в качестве контроля прототипа - нативный антиген и сыворотку больного. Нативный антиген М. pneurnuniae представляет собой концентрированную и обработанную ультразвуком культуру возбудителя с содержани0 ем белка 400-500 мкг/мл.

Реакция протекает при силе тока 40 niA, напряжении 20Ю В в течение 1 ч. О положительном результате реакции судят по наличию линии преципитации между лунками.

СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИИ MYCOPLASMA PNEUMONIAE путем проведения реакции встречного иммуноэлектрофореза исследуемой сыворотки и специфического антигена с последующим определением антител, по наличию которых диагностируют заболевание, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве антигена используют гликопротеидную фракцию антигена Mycoplasma pneumoniae.