Изобретение относится к способу получения не описанных в литературе производных 5,6,7,7а-тетрагидро-4Н-тиено-(3,2-с)-пиридинона-2 общзй формулы .А где R - фенил, незамещенный или замещенный атомом галогена, низшим алкильным радикало нитро- или цианогруппой, Rj - водород или низший алкильны радикал, или их солей с минеральными или орга ническими кислотами, обладающих фармакологической активностью. Цель изобретения - разработка способа получения новых производных 5,6,7,7а-тетрагидротиено (3,2-с)пири динона-2 общей формулы } или их солей, которые обладают высокой антиагрегатной активностью в отношении тромбоцитов. Пример 1. 5-(2-Хлор-бензил) -5,6,7,7а-тетрагидро-4Н-тиено(3,2-с)2-пиридиион. А. .Получение 1-(2-хлор-бензил)-4 -оксо-З-пиперидин -метилацетата. Добавляют по каплям раствор 100 г (0,355 моль) С1-(2-хлор-бензил)-4-оксо-3-пиперидин -этилкарбоксилатав 400 см 1, .-диметоксиэтана в смесь из 17,04 г (0,355 моль) гидрида натрия (суспензия 50%) в 250 см 1 2-диметоксиэтана, перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, затем добавляют по каплям раствор из 59,28 г (0,355 моль) этил бромацетата в 250 см 1,2-димексиэтана. Перемешивают при комнатной температуре в течение 2ч, фильтруют образовавшийся осадок, промывают его эфиром и концентрируют фильтрат в вакууме. Осадок растворяют в воде и экстрагируют хлористым метиленом. Органические экстракты промывают водой, сушат сульфатом натрия, фильт руют на слое двуокиси кремния и концентрируют в вакууме. Полученную, желтую смолу (123,2 г растворяют в 850 см 6 н. соляной кислоты н раствор кипятят в атмосфере азота в течение 4 ч. После охлаждения реакционную смесь концентрируют в вакууме, добавляют воду и экстрагируют эфиром. Водные фазы подщелачивают добавлением едкого натра, затем доводят до рН С 4 добавлением уксусной кислоты и экстрагируют хлористым метиленом..Органические фазы промывают водой, сушат сульфатом натрия и выпаривают досуха. Полученный смолистый продукт (93,8 г) растворя-ют в ацетоне и обрабатывают эфирным раствором хлористого водорода. Полученньй хлоргидрат С1-(2-хлор-бензил)-4-оксо-З-пиперидин -уксусной кислоты фильтруют, промывают ацетоном, затем эфиром и сушат в вакууме: белые кристаллы-, т. шт. (разл.) при 180 С, выход 64%. Перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч раствор из 30 г полученного хлоргидрата в 300 см метанола, насьш5енного хлористым водородом. Вьшаривают в вакууме при температуре ниже , добавляют, доводят до щелочной реакции добавлением бикарбоната натрия и экстрагируют хлористым метиленом. Органические экстракты промывают водой, сушат сульфатом натрия и выпаривают досуха. Полученный кетоэфир в виде желтой смолы используют без очистки на следующей стадии. ИК-спектр (пленка: СР: 1720 см ). ЯМР (CDClj): 7,05-7,76 (m4H);t 3,72 (S 2Н); 3,62 (S ЗН). Б. 5-(2-Хлор-бензил)-5,6,7,7а-тетрагидро-4Н-тиено (3,2-с)-пиридинон-2. Производят одновременно барботирование потоков хлористого водорода и сероводорода в раствор, нагретый до 85 С и содержащий 4,5 г (0,0152 моль) полученного кетоэфира в 45 см уксусной кислоты. Концентрируют в вакууме, поглощают осадок водой, доводят до щелочной реакции добавлением бикарбоната натрия и экстрагируют хлористым метиленом. Экстракты промывают водой, сушат сульфатом натрия и выпаривают досуха. Получают целевой продукт в виде желтого масла (3,6 г, выход 86%),, превращают в оксалат с т. пп. (этанол) добавлением ацетонового раствора щавелевой кислоты. Хлоргидрат-полугидрат: т. п.п. с разл. при 180 С (осаждение в ацетоне), Основание: т. пл. 73-74 С, 5 С (этанол). Примеры 2-9. Следующие соединения псглучают по аналогичной методике. Производное 2: 5-бензил-5,6,7,7а-тетрагвдро-4Н-тиено (3,2-с)-пиридинон-2. Малеат: бежевые кристаллы, т.пл. 132-134 °С (изопропанол). Производное 3: 5-(4-хлорбензш1)-5.,6, 7, 7а-тетрагидро-4Н-тиено(3,2-с)пиридинон-2. Малеат: бежевые кристаллы, т.пл. 158-160 0 (этанол). Производное 4: 5-(2-метилбензил)5,6, 7,7а-тетрагидро-4Н-тиено (3,2-с)пиридинон-2. Оксапат: бежевые кристаллы, т.пл. 195-197 С (метанол). Производное 5: 5-C(2-xлopфeнил)-1-этшI -5,6, 7, 7а-тетрагидро-4Н-тиено(3,2-е)пиридинон-2. Хлоргидрат: желтые кристаллы, т. пл. 140-142 С. Основание: ЯМР (CDCI,): 7,30 (m4H 6,05 и 5,95 (2S, 1Н), (2 диастериоизомера), Производное 6: (2-xлopфeнил) -пpoпил-5,6,7, 7а-тетрагидро-4Н-тиено (3,2-е)-пиридинол-2. Хлоргидрат: бежевые кристаллы, т. пл. 124-126 0. Основание: ЯМР (CDOIj): 7,30 (m4H 6,05 и 5,90 (2S, 1H)i (2 диастериойзомера;. Производное 7: 5-(2-цианобензил)-5,6,7,7а-тетрагидро-4Н-тиено(3,2-с)пиридинон-2. Оксапат: бежевые кристаллы, т.пл. 176-178о (ацетонитрил) . Основание: ЯМР (ODOl,): 7,50 (m4H); 6,00 (S, 1Н); 3,80 (S, 2Н). Производное 8: 5-(2-нитробензил)-5,6,7,7А-тетрагидро-4Н-тиено(3,2-с)пиридинон-2. Оксапат: бежевые кристаллы, т. пл 186-188°0 (изопропанол-этанап5. Основание: ЯМР (ОВ01з): 7,50 (т, 4Н) 5,95 (S,1H); 3,90 (S, 2Н), Производное 9: 5-(2-бромбензил)-5,6,7,7а-тетрагидро-4Н-тиено(3,2-с)-пиридинон-2. Океапат: бежевые кристаллы, т, пл 151-153 0 (изопропанол). Основание: (ODOIj): 7,30 (m, АН), 5,96 (S, 1Н),- 3,75 (S, 2Н). Токсикологические и фармакологические исследования проведены в срав нении с аналогами по строению 2-хлор-5-бензил-4,5,6,7-тетрагидротиен(3,2-е)пиридинон, (сравнительное соединение А) и 2-циано-5-бензил-4,5,6, 7-тетра-гидро-тиен (3, 2-е) пиридинон (соединение В). Токсикологическое исследование. Изучены острая, хроническая, субхроническая и замедленная токсичности. Опыты, проведенные на различных видах животных (мышах, крысах и кроликах), свидетельствуют о слабой токсичности соединений общей формулы Т, а также их хорошей толерантности. Ниже приведены (25 ч/кг веса тела), вычисленные по методу 1 1иллера и Тентера, при внутривенном введении мышам, а также представлены результаты, полученные для производных формулы f и сравнительных соединений А и В. Эти результаты показывают, что токсичность производных общей формулы 1 по меньшей мере вдвое еньше токсичности соединений А и В. Кроме того, опыты показали, что производные общей формулы не вызывают у животных различных видов в ходе проводившихея опытов местных или общих реакций, нарушений показаНИИ регулярно проводившегося биологического контроля, расстройств микро- или макроскопического характера. Исследование потомства не обнаружило тератогенного действия испытуемых соединений.
Фармакологическое исследование.
Изучена способность подавлять аггрегацию тромбоцитов и противотромбоэную активность по сравнению с соединениями А и В.
Подавление соединения тромбоцитов.
У крыс Wistar, предварительно обработанных испытуемым соединением, берут кровь из яремной вены. Из этой крови после обработки цитратом и центрифугирования получают плазму, содержащую 800 + 20 тыс, тромбоцитов в 1 мм , которую применяют в дальнейшем для всех определений аггрегации тромбоцитов..
Определение аггрегации тромбоцитов при помощи АДФ (аденодиндифосфата).
Помещают 0,4 мл плазмы в силиконовую трубку, снабженную намагниченным силиконовым прутком. Трубку помещают в агрегометр, соединенный с прибором, позволяющим регистрировать изменения оптической плотности. Когда прохождение света достигает постоянного значения, в трубку вводят 0,5 мл раствора, содеожащего 10 мкмоль АДФ.
Аггрегация тромбоцитов вызывает повышение пропускаемости света, которое сопровождается последующим понижением пропускаемости на фазе разъединения.
Максимальное изменение оптической плотности, определенное таким образом по отношению к плазме, не содержащей тромбогщтов, характеризует интенсивность соединения.
Определения ььшолняют в течение 2 ч после обработки испытуемым соединением.
Определение соединения тромбоцитов при помощи коллагена.
Раствор АДФ заменяют раствором коллагена, взятого из бычьих сухожилий.
Результаты.
Выпи применены розли шые партии по по 20 крыс каждая. Каждая партия получала одну дозу испытуемого производного орально причем то же производное давали в разньк дозах от 5 до 100 мг/кг.
Значительная активность производных общей формулы J проявляется при дозе 12,5 мг/кг, тогда как для соединений А и В для получения такой же активности требуются дозы 100 мг/кг. Результаты сведены в табл. 1
(опыты с АДФ) и 2 (опыты с коллагеном) , где показано процентное подавление аггрегации тробмбоцитов, достигнутое по сравнению с контрольным опытом, через 3 ч после обработки испытуемым соединением.
Исследование кинетики аггрегации тромбоцитов.
Проводят эксперимент, относящийся к исследованию кинетики соединений общей формулы 1. Производное 1 и соединение А растворяют в пропиленгликоле и дают крысам интраперитонально в дозе 100 мг/кг веса тела, тогда как контрольные мьшш получают интраперитонально только 1 мл/кг пропнпенгликоля.
Кровь отбирают через 10 и 60 мин после введения, затем ее центрифугиРУют для получения обогащенной тромбодатами плазмы.
Аггрегацию тромбоцитов в плазме, вызванную АДФ, определяют при помощи агрегометра Брайстона по нефелометрическому методу Борна.
Зависимость поД&вления от времени, полученная в результате этого эксперимента, представлена в табл. 3.
Табл. 3 показывает, что по отношению к соединению А производное .Т общей формулы Т значительно сильнее подавляет аггрегацию тромбоцитов активностью и это действие наступает гораздо быстрее.
Противотромбозная активность.
Изучена по методу экспериментального тромбоза путем экстракорпорального кровообращения.
У крысы, анестезированной путем интраперитонального введения пентобарбитала, обнажены левая аремная и правая внешняя сонная артерия. Шун составлен из одного центрального и двух боковых катетеров: белуют нить из натурального шелка вводят в центральную часть и кровообращение восстанавливается в течение 20 мин.
После остановки кровообращения путем наложения зажима нить осторожно вытягивают и медленно взвешивают
Средний вес одной влажной шелковой нити по предварительному определению 5,10 мг.
Обработку проводят за 48, 24 и 2 ч до начала кровообращения по шунту.
Продукты вводят перорально различным партиям по 20 животных каждая в виде суспензии в 10 мл/кг 5%-ного гуммиарабика в дозах 12,5i 25 50i 100 и 200 мг/кг.
В табл. 4 сведены результаты опытов с производными 1 и 3 общей формулы 1 и соединением А, представленные в виде средних значений, вычисленных для каждой партии.
Эти данные показывают активность соединений общей формулы 1, которые вызывают значительное уменьшение среднего веса тромбов, начиная с дозы 25 мг/кг, тогда как сравнительное соединение А не проявляет противотромбозного действия даже при повышенных дозах.
5 Кроме того, опыты показывают, что в противоположность соединениям А и В производные общей формулы 1 не обладают противовоспалительными свойствами и не оказывают сосудорасширяющего действия. Следовательно, они проявляют более избирательные свойства (дополнительная актиность, если она не требуется, может
повредить больному). 5
Токсикологические и фармакологические исслед ования свидетельствуют о слабой токсичности соединений общей формулы Т и их хорошей толе0рантности, а также о способности подавлять аггрегацию тромбоцитов и противотромбозных свойствах, которые
I
обуславливают целесообразность их 5 применения при лечении человека и животных,
Таблица 1
Таблица 2
Т a б л и ц а А
Способ получения производных 5, 6, 7, 7а-тетрагидро-4Н-тиено
Сравнительное
соединение А
Контрольный опыт с 5% гуммиарабика
28,8623,04
23,13
30,09
| Эльдерфилд Р | |||
| Гетероциклические соединения | |||
| М., ИЛ, т | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| Переносная мусоросжигательная печь-снеготаялка | 1920 |
|
SU183A1 |
