Способ получения 5-(2-хлорбензил)-3-окси-5,6,7,7а-тетрагидро-4 @ -тиено(3,2- @ )пиридинона-2 или его солей Советский патент 1986 года по МПК C07D495/04 A61K31/381 A61K31/4535 

1

Изобретение относится к способу получения новых химических соединений, а именно 5-(2-хлорбензил)-3- -окси-556, 7 9 7а-тетрагидро-4Н--тиено- (3,2-с)гшридинона-2 формулы

,

оСЪ

S.С1Ш

лли его солей, которые могут найти применение в качестве биологически активных веществ.

Целью изобретения является разработка на основе известного метода способа получения новых соединений; обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Пример. 5-(2-Хлорбензил)3- окси-5,6,7s 7а-тетрагидро 4Н-тиено- (3,2-с)пиридинон 2 (J) .

а)5-(2-Xлopбeнзил)3-oкcиимl: нo- -4, 5,6, 7-тетрагидро-ЗН-тиено(3,2-е) пиридинон-2 (III).

. 25 г (О,,0068 моль) оксалата 5-(2-клорбензил)-55б,1 7а-тетрагидро-4Н- -тиено-{3 J 2-с)-пиридинона-2 (И) сус певдируют в 125 мл ледяной уксусной кислоты в инерционной атмосфере и после охлаждения реакционной смеси д 0-5 С прикапывают 5 г ( моль) нитрита натрия, растворенного в 30м воды. Оставляют при комнатной текпе- ратуре на 7 часов. Кристаллы отфильт ровываюТр промывают эфиром и сушат. Продукт перекристаллизовывают из воды. Получают кристаллы желтого цвета. Т.плс 22Q°C, выход 70%, вес. 19 Го

б)5-(2 Хлорбензил)-3-оксиимино- -За,4, 5,6, 7, 7а--гексагидро-ЗН-тиено- -(3,2-е)-пиридинон-2 (IV).

15 г ( моль) соединения формулы (ill)5 полученного выше; растворяют в смеси 900 мл метанола и 8 мл 70%-ной хлорной кислоты. Добавляют в реакционную среду 4 i 10%-ного палладия-на-угле в виде суспензии в 100 мл эт.анола. Реакционную смесь подвергают гидрированию в реакторе при обычном давлении (1 атм) и оставляют на 6 ч при комнатной температуре. После отфильтро-- вывания катализатора вьшаривают досуха реакционную среду.

Растворенньм в воде остаток нейтрализуют водным насыщенным раствором бикарбоната натрия. Водную фазу

1207394

экстрагируют дихлорметаном, органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и выпаривают досуха. Маслянистый остаток очищают с помощью хроматографии в колонне с двуокисью кремния (элюент: толуол-этилацетат 1:1), Полученное соединение переводят в оксалат.

а) 5-(2-7лорбензил)-3-окси-55б,7, 7а-тетрагидро-4Н-тиено-(3,2-е)-пири- динок-2 (i).

10,4 г (0,0334 моль) соединения формулы (IV), полученного в предьщу- щей стадии, растворяют.в смеси 250 кп изопропилового спирта и 45 мл 2 н.соляной кислоты. Кипятят с обратным холодильником в атмосфере инертного газа в течение 4 ч, выпаривают досуха и остаток обрабатывают водным насьаценным раствором бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу высушивают над безводнь м сулх,фатом натрия и выпаривают досуха. Полученный маслянистьй остаток очищают фильтрацией через слой двуокиси кремния (элюант: толуол-этилацетат 1:1). Получают основание в виде кристаллов бежевого цвета. Выход 81%, т.пл. 12 s°C,, вес. 9,25 г.

Элементный ансшиэ для геми-окса- лата соединения (I).

C,H,C1N02S, 0,5 .

М 341,801 .

Найдено, %: С 52„85| Н 4,47; и 4,28.

Вычислено, %: С 52,86; Н 4,43; Ы 4 J i .

Масса: М 295.

КК (КВг) (основание) 1685 ()5 3400 (ОН); 1650 ().

ЯМР НЧСВС) (основание) м.д. : 1,20-3,25 (мультиплет, 5Н, SCHCH,.,); 3,80 м.д. (синглет, 2Н,, ); 3-90-4,40 (г-гультиплет, 2Н, ЫСН -тие- нил); и 65 (мультиплет 4И, ароматические) .

51МР C (CDC1.,) (основание):

(95,24 (СО; 145,17 (С2); 133,10(03) 52J4 (С4); 51,11 (С5); 33,57 (С6); 44J4 (С7)| 58,09 (С8); 135,16 (С9);

134,62 (СЮ); 129,76 (С11); 128,79 (С12); 127,09 (С13); 131,22 (C14) .

Различные соли получают обь1чными способами.

Геми-оксалат: кристаллы кремового цвета с т.пл. 170 с (из смеси изопро паиола и ацетонитрила).

Нитрат: кристаллы розового цвета с т.пл. 181°С (из смеси изопропанола и метанола).

Гидрохлорид: кристаллы бежевого цвета с т.пл. 139 с (из изопропанола) .

Токсикологическое исследование соединения (I) на острую токсичность хроническую токсичность, субхроническую и пролонгированную токсичность показывают его хорошую переносимость и слабую токсичность.

Фармакологическое исследование соединения/(I) показывает его инги- бирукнцую активность в отношении тромбоцитной агрегации и антитром- боцитную активность. Соединение (1) испытывается в виде геми-оксалата

Ингибирующая тромбоцитную агрегацию активность.

Эксперимент осуществляется на крысе, которая получала в течение трех дней перорально по 100 мг сое- динени; (1) в моменты времени 48, 24 и 2 ч. В момент О ч берут на анализ 4 мл крови из яремной вены анестезированного животного. Эта цитра- тированная кровь используется для измерений агрегации.

а) Измерение тромбоцитной агрегации с аденозиндифосфатом.

2 мл цитратированной крови быстро выливают в маленький стаканчик по- мещенный на магнитную мешалку и снабженный намагничиваемым стержнем. После перемешивания в течение нескольких секунд в стаканчик вводят 0,4 мл раствора, содержащего-О,66 мкг аденозиндифосфата (АДФ) на 1 мл. После перемешивания в течение 90 с осуществляют два отбора по 0,5 мп крови: первьй смешивают с 0,5 мл раствора ЭДТА-формола, второй смешивают с 0,5 МП раствора одного ЭДТА

Добавление ЭДТА-формола осуществляется с целью стабилизации крови и, следовательно, фиксации агрегации, в то время как ЭДТА, напротив, вызывает дезагрегацию всех тромбоцитных скоплений.

После вьдерживания в течение 10 мин и центрифугирования обеих смесей

5

C

5

0 5

о

,.

5

5

с медленной скоростью в течение 5 4Ин, чтобы отделить красные кровяные тельца (эритроциты), отбирают надоса- дочную плазму, обогащенную тромбоцитами PRP, разбавляют.И подечитьтают тромбоциты.

Интенсивность агрегации определяется соотношением:

число тромбоцитов в ЭДТА-формоле

число тромбоцитов в ЭДТА

X 100 процент неагрегированных тромбоцитов.

Испытуемый продукт тем больше ингибирует агрегацию тромбоцитов, чем ближе соотношение к 100.

Таким образом, определяют, что в партии (5 крыс), обработанной соединением (I), полученный процент составляет 44±13, тогда как для контрольной партии (5 крыс) процент 6+2.

б) Измерение тромбоцитной агрегации с коллагеном.

К 1,5 мл цитратированной крови добавляют 0,10 мп раствора, содержащего 10 мкг коллагена на 1 мп. Среду поддерживают при перемешивании, подсчет тромбоцитов осуществляют без перерыва.

Уменьшение количества свободных тромбоцитов в зависимости от времени протекает непрерывно и позволяет изобразить кривую, наклон которой дает начальную скорость.агрегации.

Для обработанной соединением (1) партии (5 крыс) начальная скорость агрегации составляет 2,33+1,18,тогда как для необработанной контрольной партии (5 крыс) она составляет 12,44+2,65.

Изучение ингибирующей активности в отношении тромбоцитной агрегации направлено Также на воздействие соединения (3L) в зависимости от времени кровотечения.

Эксперимент осуществляется на крысе, которая получала за 65, 41 и 17 ч до негр перорально 200 мг соединения (J) в виде суспензии в 10 мл/кг водного раствора гуммиарабика. После анестезии пентобар- биталом хвост крысы отрезают на 5 мм от конца. Кровь тщательно вытирают все 15 с, заботясь о том, чтобы не затрагивать рану. Гемостаз дости- .гается тогда, когда происходит прекращение кровотечения в течение одной

5

минуты. Время кровотечения выражают в секундах, и время выие 1200 с (20 №1и) более не подсчитывают.

Таким образом определяют, что для контрольных животных, которые получают только гуммиарабик, средне время кровотечения 390 с, тогда как для обработанных животных оно выше 1200 с.

Антитромбоцитная активность изучается согласно двум методам:

а)Метод экспериментального тромбоза на шелковой нити.

У анестезированной за счет интра перитонеальной инъекции пентобарби- тала крысы обнажают левую яремную вену и правую наружную сонную артерию.

Обходный артерио-венный анастомо образован центральным катетером и двумя латеральными катетерами, природная белая шелковая нить вводится в центральную часть, и циркуляция восстанавливается в течение 20 мин После прекращения циркуляции за счет наложения зажима нить осторожно вытаскивают и немедленно взвешивают. Средний вес влажной шелковой нити определяется предвар;; гельно.

Обработка осуществляется за 48 24 и 2 ч до начала циркуляции крови в обходном анастомозе за счет введения перорально 200 мг/кг соединения (1) в виде суспензии в 10 мл/кг 5%-ного гуммиарабика, причем конт- роль получает только 5%-ный гуммиарбик .

Таким образом определяют, что средний вес тромба в двух партиях по 10 крыс составляет 38562+1518 мг для контрольных животных и 26,00+ + 6,42 для обработанных, животных (-35%)

б)Метод тромбоза вены с витком (со штопором),

Редактор 0. Бугир

Составитель В Теренин Техред А.Кабкнеи

Заказ 8745/61 Тираж 379Подписное

ВНИШИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д. 4/5

Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. П:роектная, 4

6

Разрезан {ук1 металличес:кую спираль помещают в нижнюю полую вену крысы, которая за 48, 24 и 2 ч nojiy- чила перорально 200 мг/кг испытуемого соединения, суспендированного в 10 мл/кг водного 5%-ного раствора гуммиарабика.

Спустя 5 ч эту спираль вынимают с тромбом, который она удерживает,

осторожно сушат путем последовательных тампонирований на фильтровальной бумаге и взвешивают. Спираль затем ос вобожд,ают от тромба, снова сушат и снова взвешивают. Таким образом получают по разнице средний вес тромба, которьй составляет 3,4 + +0,4 мг для контрольных крыс (10 крыс5 которые получают только гуммиарабик) и 251+0,3 мг для обработанных соединением (I) (-36%) крыс (10 крыс),

В таблице представлены сравнительные данные антитромбоцитной активности и ингибирующей активности в отношении тромбо1щтной агрегаи;ии соединения () и известного соединения ряда тиенопиридина 5-(2-хлорбен- зил)-4,5,65 7-тетрагидротиено-(3,2-с)- пиркдина (тиклопидина).

Соедийене кие ;

Тиклопи- дин

44+13

1

) тест с коллагеном2,33+1

18 2,29+2,04

Противотромбоз- ное действие, %:

а)шелковая нить

б)штопор

Корректор Л. Патай

Способ получения 5-(2-хлорбен- зш1)-3-окси-5,6,7,7а-тетрагидро-4Н- -тиено(3,2-с)пиридинона-2 формулы НО0 или его солей, отличающий- с я тем, что, соединение формулы а подвергают нитрозированию нитритом натрия в ледяной уксусной кислоте в инертной атмосфере, полученное соединение формулы гидрируют в присутствии палладия на угле и хлорной кислоты в спирте, образующееся соединение формулы HON нагревают до кипения с соляной кислотой в изопропиловом спирте в инэрт- ной атмосфере и выделяют целевой продукт в свободном виде или в виде соли. 1чЭ О J bd х 4