Способ разделения мононуклеарных фагоцитов на субпопуляции Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к иммунологии и цитологии.

Цель изобретения - упрощение способа.

Пример. Разделение резидентных перитонеальных макрофагов.

Получают суспензию клеток перитонеального эксудата.от 30-35 интактных мышей самцов линии F (СЙАхСС57В) весов 20-25 г. На культуральных чашках из полистирола, предварительно покрытых 0,25%-нойфетальной телячьей сывороткой (ФТС) производят адгезию полученных клеток в культуральной среде 199 с 0,25%-иой ФТС и 20 мМ НЕРЕ-буфера при рН 6,9 при температуре С в течение 1 ч. Затем неприлипшие клетки переносят на другие чашки для адгезии при 10 С в течение 1 ч. Далее суспензию клеток, неприлипших при 10 С, переносят на новые чашки , и проводят адгезию при 28с 1 ч. :На последнем этапе неприлипшие при 28°С клетки инкубируют при 37 С 1 ч добавляя в среду ФТС до 10% конечной концентрации. Все полученные в

792232

виде монослоев субпопуляции тщательно отмывают для удаления лимфоцитов. Для определения активности ферментов клетки лизируют дистиллированной 5 водой путем трехкратной процедуры замораживания-оттаивания. Для каждой из субпопуляций перитонеальных макрофагов определяют следующие показатели: число клеток, активность лактатдегидрогеназы, одного из ключевых ферментов гликолиза, активность цитохромоксидазы, ключевого фермента окислительного фосфорилирования, активность оргина.зы, ключевого фермента цикла мочевины и одного из основных ферментов катаболизма аминокислот, а также уровень Гс рецепторов, являюш 1хся ключевыми структурами для осуществления макрофагами фагоцитарного процесса, медиирования неспецифических и специфических иммунологических реакций.

Каждая из полученных субпопуля- ций перитонеальных макрофагов характеризуется своими отличительными свойствами, различия между субпопуляциями носят достоверный характер.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ НА СУБПОПУЛЯЦИИ путем фракционирования исходной суспензии клеток, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, клетки последовательно инкубируют в градиенте температуры 4-37°С на полистироловых чашках, предварительно обработанных 0,25%-ной фетальной телячьей сывороткой, и субпопуляции мононуклеарных фагоцитов получают в виде монослоя.