Способ разделения лейкоцитов Советский патент 1988 года по МПК G01N33/52 

СлЭ

эо

30 X)

о

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью изобретения является упрощение способа и одновременное получение лимфоцитов, макрофагов и нейтро- филов.

Пример. Экспериментальной моделью являются клетки перитонеально- но эксудата мышей СВА интактных и с различными сроками внутрибрюшинной инъекции пептона. Клетки перитоне- ального Эксудата получают промыванием брюшной полости мышей физиологическим раствором, забуференным фосфатами (NaCl 128 Ml-1, NaHjPO, 10 мМ, рН 7,2), затем осаждают центрифугированием в течение 8 мин при 1200 g при 2-4°С. Клетки (40x10), содержа- щие 3,84x10 лимфоцитов, 25,68x10 макрофагов и 10,48x10 нейтрофилов ресуспендируют в среде Игла, содержащей 20% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки и 10 мМ HEPES (рН 7,2) и наносят на культуральные пластиковые чашки (2x10 /мл), поверхность которых предварительно обрабатывают в течение 2 ч последовательно 2%-ным водным раствором декальцини- рованного желатина и декальцинирован- ной эмбриональной телячьей сывороткой. Чашки перед нанесением клеток ополаскивают физиологическим раствором, забуференным фосфатами (рН 7,2). Клетки инкубируют при 37 С в течение 90 мин в атмосфере 5% СО. Неприлипшие лимфоциты получают трехкратным промыванием монослоя раствором Хенк- са и собирают центрифугированием, при этом выход 81%, чистота 92%. После этого к монослоям клеток добавля

ют 3 мл раствора, представляющего собой смесь 1:1 (среда Игла, содержа-, щая 20% эмбриональной телячьей сыворотки и 10 мМ этилендиамино-тетраук- сусная кислота в физиологическом растворе, забуференном фосфатами, рН 7,2). Отделение макрофагов от поверхности проводят при встряхивании культуральных чашей в течение 30 мин, после чего «х собирают центрифугированием, цри этом выход 54%, чистота 94%. Получаемые нейтрофилы остаются на покрытой желатином пластиковой поверхности, выход их 50%, чистота 96%. Идентификацию вьщеляемых предлагаемым способом клеток проводят с помощью окраски по Романовскому-Гимза и на неспецифическую эстеразу, являющуюся маркерным ферментом для макрофагов и моноцитов.

Использование изобретения позволяет получить лимфоциты, макрофаги и нейтрофилы с высокой степенью чистоты и выхода в течение 2-3 ч.

Формула изобрете1тия

Способ разделения лейкоцитов путем центрифугирования и отбора целевых продуктов с последующей их очисткой, отлича ющийся тем, что, с целью упрощения способа и одновременного получения лимфоцитов, макрофагов и нейтрофилов, после центрифугирования клетки наносят на пластиковую поверхность последовательно обработанную 2%-ным водным раствором декальцинированного желатина и де- кальцинированной эмбрионаньной телячьей сывороткой.

Изобретение относится к медицине, а- именно к иммунологии. Цель изобретения - упрощение способа и одновременное получение лимфацитов, макрофагов и нейтрофилов. Для этого промытые физраствором, забуференным фосфатами, клетки перитонеального экссудата лабораторных животных осаждают центрифугированием 8 мин при 1200 g и 2-4°С. Клетки, содержащие лимфоциты, макрофаги и нейтрофилы, ресуспендируют в среде Игла, содержащей 20% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки и 10 мМ HEPES (рН 7,2), и наносят на культу- ральные пластиковые чашки, поверхность которых предварительно обработана в течение 2 ч последовательно 2%-ным водным р-рон декальцинирован.ного желатина и декальцинированной эмбриональной телячьей сывороткой. Клетки инкубируют 1,5 ч при 37 С в атмосфере 5%-ного COj. Неприлипшие лимфоциты получают 3-кратным промыванием монослоя р-ром Хенкса и собирают центрифугированием. Отделение макрофагов производят встряхиванием культуральных частей в течение .30 мин, затем их собирают, центрифугированием. Получаемые нейтрофилы остаются на покрытой желатином пластиковой поверхности. i СЛ

Составитель Е„Ярных Редактор Т.Парфенова Техред А.Кравчук Корректор В.Бутяга

Заказ 1576/47

Тираж 847

ВНИИ.1Ш Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Ра тпская наб., д. 4/5

Подписное