Способ разделения мононуклеарных фагоцитов на субпопуляции Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

113072842

Изобретение относится к медицине, и лизисе микроорганизмов. Полученные а именно к иммунологии и цитологии. данные представлены в табл.1.

Целью изобретения является повыше- Пример 2.. Разделение пери- качества препарата за счет того, тонеальных макрофагов, что исходную суспензию клеток после- 5 Получают суспензию клеток перито- .довательно инкубируют на полистироло- неального экссудата от 20-25 интакт- вых чашках, предварительно обработан- ных мышей. На культуральных чашках ных альбумином, и инкубирование прово- из полистирола, предварительно покры- дят при рН среды 7,0-7,1 в градиенте тьк альбумином в концентрации концентраций альбумина 0,1-2 мг/мл О о,1 мг/мл, производят адгезию полу- при 12°( , либо в градиенте температу- ченных клеток в среде 199 с 11 мМ ры 12, 20, при концентрации аль- HEPES буфера при рН 7,1 при 12°С в бумина 2 мг/мл, причем субпопуляции течение 30 мин. Затем неприлипшие мононуклеарных фагоцитов (МНФ) полу- клетки переносят на другие чашки ,пред- чают в виде монослоя. варительно покрытые альбумином в

Пример Г. Разделение рези- концентрации 1 мг/мп, производят а д- дентных перитонеальнь с макрофагов. ™ полученных клеток в среде 199

с 11 мМ HEPES буфера при рН 7,1 при

Получают суспензию клеток перито- ,д 12 С в течение 30 мин. Затем непри- неального экссудата от 20-25 ин- липшие клетки переносят на третьи тактных мышей самцов линии F, (СВА чашки, пред вари тел покрытые аль- XC57BL) весом 20-25 г. На культураль- бумином в концентрации 2 мг/мп, про- ных чашках из полистирола, предвари- изводят адгезию. Далее все три чаш- тельно покрытых альбумином (концент- 25 инкубируют при 37 С с 5%-ной сы- рация альбумина в среде прединкубации вороткой рогатого скота, после чего чашек 2 мг/мл), производят адгезию чашки отмывают от лимфоцитов. Во полученных клеток в культуральной ере- всех трех чашках определяют число де 199 с 10 мМ HEPES буфера при клеток, интенсивность фагоцитоза, рН 7,0 при 12°С в течение 30 мин. За- 30 крецию лизоцима и по количеству тем неприлипшие клетки переносят на клеток в чашке с 0,1 мп/мл альбумина другие чашки, предварительно покры- выделяют популяцию секретирующих кле- тые альбумином в более низкой концен- ток, а по количеству клеток в чаш- трации (1 мг/мл) для адгезии при П°С ке с 1 мл/мл альбумина вьвделяют по- в течение 30 мин . Затем суспензию пуляцию неактивных клеток, а в чашке клеток, не прилипших при концентрации - с 2 мг/мл вьщеляют популяцию фагоци- альбумина 1 мг/мл, переносят на но- тируюш;их клеток (см, табл.1), вые чашки, покрытые альбумином, в В табл. 2 дано сравнение различий концентрации 0,1 мг/мл, и проводят ад- по биохимическим параметрам меаду гезию также при 12°С в течение ЗОмин. .,, Фракциями,, полученными по известному На последнем этапе все полученные в предложенному способам, виде монослоев субпопуляции инкуби- Сравнительные данные табл. 2 сви- руют (37 С) с 5%-ной сывороткой ро- детельствуют об улучшении разделения гатого скота и тшательно отмывают по биохимическим параметрам, т.е. о для удаления лимфоцитов. Для каждой большей чистоте получаемых субпопуля- из субпопуляций перитонеальных макро- ций, фагов определяют следующие показатели: число клеток,интенсивность фаго- .

цитоза опсонизированньк эритроцитов Формула изобретения барана (ЭБ) через Fc-рецепторы, одно- „

го из ключевых способов фагоцитоза и Способ разделения мононуклеарньгх элиминирования макрофагами чужерод- фагоцитов на субпопуляции путем ин- ньпс объектов, бактерий и др.; секре- кубации в среде 199 на белковом суб- . цию лизоцима, разрушающего клеточные . страте с последующим учетом клеток, стенки бактерий, обеспечивающего бак- отличающийся тем, что,с терицидную активность сыворотки кро- целью повьш1ения качества препарата ви, секрецию /5-галактозидазы, од- при разделении клеток на фагоцитирую- ного из ключевых лизоСомальных фер- щие, неактивные и секретирующие фаго- ментов, участвуюш 1х в переваривании циты, среда дополнительно содержит

313072844

HEPES-буфер рН 7,0-7,1 при следующих ем концентрации альбумина от 0,1 до соотношениях,компонентов, мас.%: 2 мг/мл, при концентрации альбумина

HEPES-буфер10-11

Среда 199Остальное

0,1 мг/мп вьделяют популяцию секре- тирукяцих клеток, а при концентрации 5 альбумина 1 мг/мп вьщеляют популяци неактивных клеток и при концентраци альбумина 2 мг/мл выделяют популяцию фагоцитирующих клеток.

а в качестве белкового субстрата используют альбумин, при этом инкубацию проводят с постепенным увеличениИзвестный способ (разделение на ФТС)

1(4)

2(10)

3(28)

4(37) Максимальные различия:

Предлагаемый способ (разделение на альбумин)

Пример 1 (t 12°С)

0,1 мг/мп вьделяют популяцию секре- тирукяцих клеток, а при концентрации альбумина 1 мг/мп вьщеляют популяцию неактивных клеток и при концентрации альбумина 2 мг/мл выделяют популяцию фагоцитирующих клеток.

Таблица 1

Таблица 2

Продолжение тлбл.2

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и цитологии. Цель изобретения - повышение качества препарата. Получают суспензию клеток перитонеального экссудата от интактныхмьшей. На культу- ральньгх чашках, покрытых альбумином, производят адгезию полученных клеток в среде 199 с HEPES-буфером. Неприлипшие клетки переносят на другие чашки, покрытые альбумином в концентрации 1 мг/мл, адгезируют полученные клетки. Затем неприлипшие клетки переносят на третьи чашки, покрытие альбумином в концентрации 2 мг/мп, и адгезируют. Все три чашки инкубируют с сывороткой Рогатого скота и чашки отмывают до лимфоцитов. Во всех трех чашках определяют число клеток, интенсивность фагоцитоза и секрецию лизоцима. По количеству клеток в различных, чашках вьщеляют популяции секретирующих клеток, неактивных и фагоцитирующих клеток. 2 табл. (Л