Способ хроматографического разделения веществ Советский патент 1985 года по МПК B01D15/08 

Изобретение относится к хроматографии, преимущественно препаративной, и может быть использовано при разделении и анализе трудноразделяемых веществ.

Целью изобретения является снижение потерь разделяемых веществ при обеспечении их концентрирования.

На чертеже изображено устройство, реализуюн ее предлагаемый способ,

Устройство состоит из двух хроматографических колонок 1 и 2, входы которых соединены с восьмиходовым циркуляционным краном 3, канала 4 для подачи основного потока подвижной фазы, соединенного через устройство для ввода пробы 5 с одним из входов циркуляционного крана 3, детектора 6, установленного в циркуляционной схеме между колонками 1 и 2 и соединенного с ними через соответствующие каналы в циркуляционном кране 3, канала 7 для подачи дополнительного потока подвижной фазы и сумматора потоков 8, в котором осуществляется смещивание основного и дополнительных потоков подвижной фазы.

Пример 1. Разделение выполняют в хроматографической системе из двух колонок по 250x25 мм, собранных в циркуляционную схему согласно чертежу. Колонки наполнены сорбентом - Силасорб-С g с частицами 10 мкм. Подвижная фаза (основной поток) - ацетонитрил-вода (80:20), дополнительный элюент - ацетонитрилвода (60:40). Скорость основного потока 10 мл/мин, а дополнительного ,5 мл/мин. Давление на входе в систему 48 атму температура комнатная, детектор УФ-254 нм. Пробу вводят с помоцдью крана-дозатора с объемом петли 200 мкл. Разделяемая смесь - антрацен и фенантрен по 30 мг каждого.

После прохождения пробы через первую колонку (регистрируется с помощью детектора) в сумматор потоков подают дополнительный элюент, элюирующая сила которого вследствие уменьщения содержания ацетонитрила у.меньшается. Вместе со смещанным элюентом проба поступает во вторую колонку (регистрируется детектором по исчезновению сигнала от разделяемых соединений). Переключением циркуляционного крана 3 (чертеж) в эту колонку подают основной поток, обладающий больщей элюирующей силой. При этом происходит сжатие хроматографической зоны из-за больщей скорости движения задней границы зоны. Одновременно поворот крана 3 обеспечивает изменение последовательности соединения колонок и колонка 2 становится нервой по ходу движения подвижной фазы. Количество циклов движения веществ пробы через хроматографические колонки для полного разделения указанной смеси составляет 10. Фракционирование указанных соединений не сопровождается потерями

вещества и характеризуется их концентрированием (объем элюата после 10 циклов, в котором распределена проба, составляет 25 мл).

По сравнению с известным способом при том же количестве циклов концентрирование выще в 3 раза (1,2 мг/мл разделенных веществ по сравнению с 0,4 мг/мл), при этом исключены потери веществ. Потери веществ при осуществлении известного способа составили 17%.

Пример 2. Хроматографические колонки 1 и 2 заполняют окисью алюминия. Циркуляционную хроматографию осуществляют в парах воды в смеси с гелием. В сумматор потоков подают чистый гелий. Производят разделение углеводородов. Вследствие снижения парциального давления (lapa после смещения с основным потоком, гелия увеличивается адсорбционная активность алюмогеля, и зона разделяемых веществ сжимается (фронт зоны замедляет продвижение по колонке).

Таким образом, происходит концентрирование храматографической зоны без потери разделяемых веществ.

Пример 3. Колонки заполняют сорбентом с октадецилсилильной привитой фазой. Циркуляционную хроматографию проводят в потоке проявителя, представляющего смесь метанол-вода. Разделению подвергают смесь фенилтионидантоиновых производных аминокислот, удерживание которых в хроматографии на неполярных адсорбентах с полярными элюентами (водаметанол) возрастает с увеличением концентрации воды в растворе подвижной фазы. В промежуток между колоннами осуществляют непрерывную подачу потока с больщим содержанием воды. В результате смещивания основного и дополнительн ого потоков во вторую по ходу движения элюента колонку подается проявитель с меньщей элюирующей силой. После поступления разделяемой, смеси во вторую колонку кран 3 (чертеж) поворачивают так, что последовательность соединения колонок меняется на обратную и на вход второй колонки поступает элюент с большей элюирующей силой (основной поток). Происходит сжатие хроматографической зоны без потерь разделяемых веществ.

Пример 4. Хроматографические колонки заполняют катинообменнойсмолой.

Циркуляционную хро.матографию осуществляют в потоке проявителя, представляющего собой цитратный буфер с рН 4,2 В случае разделения смеси свободных аминокислот наблюдается увеличение их удерживания с повыщением рН подвижной фазы. В промежуток между колонками непрерывно подают поток элюента с большим значением рН (т. е. меньщей элюирующей силой). Это приводит к снижению 34

элюирующей силы суммарного потока,разделяемых веществ), обладающий меньс которым разделяемые вещества поступа-шим рН, а значит большей элюирующей

ют во вторую по ходу движения колонку.силой. Задняя часть хроматографической

Переключением циркуляционного краназоны приобретает больщую по сравнению

в эту колонку подают основной поток (ко-с фронтом скорость и происходит конценлонка становится первой по ходу движениятрирование зоны разделяемых веществ.

1187836

СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ, включающий многократное прохождение пробы разделяемых веществ в потоке подвижной фазы циркуляцией через две последовательно соединенные хроматографические колонки, отличающийся тем, что, с целью снижения потерь разделяемых веществ при обеспечении их концентрирования, пробу после прохождения через колонку смещивают с потоком элюента, элюирующая сила которого меньще элюирующей силы подвижной фазы. (Л 00 00 00 Од