Штамм дрожжей @ @ 9703-продуцент @ -фениэтилового спирта Советский патент 1986 года по МПК C12N15/00 C12P7/00 

f

Изобретение относится к микро- биологии и представляет собой новьш штамм дрожжей, продуцирующий ароматический спирт, который может быть использован в парфюмерии.

Цель изобретения - получение штамма дрожжей, активно продуцирующего З-фенилэтиловый спирт в среду обитания.

Штамм дрожжей Saccharomyces сеге visial 9703 выделен в естественных условиях из хлебной пшеничной закваски отдельных крестьянских хозяйств села Шоржа Красносельского района Армянской ССР и хранится в Центральном музее промьгашенных; микрорганизмов института ВНИИГен.ет.ика (коллекционный номер ЦМГМ У-424).

Штамм хлебопекарных-дрожжей Saccharomyces cerevisial 9703 имеет следующие морфолого-культу- ральные и физиологические признаки.

Клетки имеют овальную форму, размер их 3,4-6,8 X 3,4-5,1. Пигментация культуры на солодовом агаре кремового цвета, колонии круглые с матовым оттенком, штрих на солодовом агаре выпуклый с волнистыми краями. На дрожжевом агаре обра.зует колонии с двумя треугольными выступами. Тип размнолсения - почкование. Споры: 1-4 в клетке, псевдомицелий не образует.

.Растет в солодовом сусле и солодовом агаре, на среде с дрожжевым отваром и на искусственных питательных средах. Факультативный анаэроб. Минимальная температура роста , оптимальная 25-30°С, симальная 35-40 С.

.Отношение к углеводам. Усваивает и сбраживает глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, рафинозу (1/3) и простые декстрины солодовог сусла, не сбраживает лактозу.

Отношение к источникам азота. Усваивает аспарагин, пептон, мочевину, сернокислый аммоний.

Отношение к органическим кислотам. Усваивает уксусную и молочную

КИСЛОТЫ.

Отношение к спиртам. Усваивает этиловый спирт, глицерин.

Обладает высокой подъемной силой (20 мин по шарику), годен для хлебопекарной промьшшенности.

Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisial 9703 способен при

12196462

.28-30°С на естественной или синтетической среде в течение-45-48 ч. В качестве естественной среды исполь,0 1

зуется солодовое сусло крепостью о .) Баллинга, которое засевают суспензией дрожжей в количестве 1% от объема среды.

В качестве синтетической среды используется среда следующего соста- 10 ва, г/л :

Глюкоза KHjPO

10-10,5 1,23-1,25 0,615-0,625 0,125-0,130 0,125-0,130 0,310-0,320

MgS04 7H.jO

СаСБ

Nad

(NH4)2S04 - Водопроводная

водаОстальное

Данная среда должна содержать сти- муляторы роста, напррдаер биотин, Са-паптотенат5 тиамин, пиридоксин, инозит.

Выделение летучих соединений из культуральной жидкости проводят с помощью дважды отогнанного петро- лейного эфира фракции 40-50°С в делительной воронке. Петролейные вьггяжки подвергают пародистилляции, отделяют эфирный слой, обезвоживают, удаляют растворитель в ультратермостате, а полученный экстракт концентрируют в холодильнике.

Экстракт летучих соединений анализируют на газожидкостном хроматог- рафв Цвет 101 известным способом.

Содержание -фенилэтилового спирта в культуральной жидкости составляет на синтетической среде 1,95 и на естественной среде 4,06 мг/л. При этом в 1 л культуральной жидкости при выращивании штамма на синтетической среде накапливается 10 г биомассы, при культивировании на естественной среде 30 г биомассы, а в пересчете на 1 кг биомассы

дролокей содержание /3 -фенилэтилового спирта составляет, мг/кг: На синтетической среде195

1а ест-ественной среде135

П 13 и м е р 1 .

Дрожжи Saccharomyces cerevisial. 9703 выращивают на солодовом сусле крепостью 6° Баллинга. Выращивание проводят при 28-30°С в конических колбах емкостью 200 мл на качалке (200 об/мин). Объем среды в колбах

3

40 мл. Посевным материалом служит 48-часовая культура дрожжей, выра щенных на той же среде и пересеянная из 72-часовых косячков сусла- агара. Засев проводят суспензией дрожжей в количестве 1% от объема среды. Продолжительность культиви- .рования 48 ч, по окончании дрожжи отделяют центрифугированием.

Выделение летучих соединений от культуральной жидкости проводят дважды отогнанным петролейным эфиром (фракции 40-50°С) в делительной воронке взбалтыванием и отстаиванием в течение 1 ч. Полученные пет- ролейные вытяжки подвергают пародис тилляции. Эфирный слой отделяют от дистиллята в делительной воронке. В эфирный экстракт добавляют сульфа натрия для обезвоживания. Растворитель удаляют при 50 С и экстракт концентрируют в холодильнике до 0,1-0,2 мл.

Полученный таким образом экстрак летучих соединений анализируют на газожидкостном хроматографе.

Редактор В. Петраш Заказ 1234/36

Составитель 3. Фалунина

Техред л.Олейник Корректор А. Ференц

Тираж 490

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ШШ Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

196464

Пример 2, Дрожжи Saccharo- myces cerevisial 9703, раса Ереван, выращивают на синтетической среде следующего состава, г на 1 л водо- 5 проводной воды: Глюкоза

10

KHjPO

СаС

NaCl

(NH.4)20

10 1,23 0,625 0,125 0,125 3,10

К основной среде добавляют витамины в расчете на 1 л воды, г: биотин 8; Са-пантотенат 500;

тиамин 500; пиридоксин 500; инозит 2500.

Условия выращивания дрожжей, экстракции летучих соединений и хроматографирования, как в примере 1 .

Содержание -фенилэтилово го спирта в хроматографирукщей части летучих соединений 80%.

Подписное

Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisial 9703 (Центральный музей промьгашенных микроорганизмов института ВНИИГенетика, коллекционный номер ЦМПМ У-424) - продуцент -фенилэтилового спирта. со О5 4 О5