Способ определения диссоциации оксигемоглобина Советский патент 1986 года по МПК A61B5/00 

Изобретение относится к физиологии, а именно к разделу адаптации к гипоксии, и может быть использовано для изучения газотранспортной функции крови.

Цель изобретения - упрощение способа.

Пример. В термостатируемую ячейку с мягким перемешиванием магнитной мешалкой, содержащую i мл глицил-глицинового буфера (рН 7,4), вносят 0,2 мл цельной крови или суспензии эритроцитов (р как в цельной крови), предварительно уравно- вешенной по кислороду с атмосферой. После установления рО2 в образец добавляют 0,02 мл взвеси пекарских дрожжей, поглощающих кислород с постоянной скоростью, для чего их преинкубируют в том же буфере (10 .мин, 37°С, 10 мМ глюкозы, 300 мг сырых коммерческих дрожжей/мл). Ячейку герметизируют. Изменения рО2 регистрируют электродом типа Кларка.

Записывают изменения рО2 в ячейке при внесении взвеси дрожжей: в отсутствие цель- ной крови, эритроцитов, в присутствие цельной крови, в присутствие суспензии эритроцитов, в присутствие суспензии эритроцитов, предварительно инкубированных 40 мин с ингибитором гликолиза - кверцитином (2, М). Для построения кривых дис- социации оксигемоглобина из полярографической записи для каждого значения рОд определяют степень насыщения гемоглобина кислородом - У. У находится как отношение количества кислорода, поглощенного в дан

ный момент времени, к максимальному количеству поглощенного кислорода. В соответствии с уравнением Хилла

:П log 02

0

5

где N - коэффициент Хилла (мера кооперативности); Y - степень насыщения гемоглобина

кислородом.

Скорость поглощения кислорода клетками дрожжей не зависит от условий эксперимента. Запись одной полярографической кривой занимает менее 30 мин. Кривая диссоциации оксигемоглобина суспензии интакт- ных эритроцитов смещена вправо по отношению к кривой диссоциации цельной крови, а кривая диссоциации оксигемоглобина эритроцитов, инкубированных с кверцетином,- влево. Получаем аналогичные смещения кривых диссоциации оксигемоглобина суспензии интактных эритроцитов влево под влиянием других ингибиторов гликолиза (дитиопиридин, монофодацетат), фтористый натрий). Всего за 60 мин измерено 10 кривых диссоциации оксигемоглобина, причем скорость потребления кислорода клетками дрожжей в течение опыта не менялась. Линейность графиков Хилла свидетельствует об истинности измеренных кривых диссоциации оксигемоглобина в физиологических пределах оксигенации гемоглобина.