Способ разделения микрочастиц Советский патент 1986 года по МПК G01N27/26 

1

Изобретение относится к способам разделения веществ, а именно к электрофорезу в рН-градиентах, и может быть использовано в биологии и медицине .

Целью изобретения является повышение производительности способа.

На чертеже показана схема.,осущест- вляющая предлагаемьй способ.

Емкость 1 заполняют, например, бора т-полиольной средой; Посредством микронасоса с регулятором 2 скорости устанавливают ламинарный поток борат-полиольного буфера в колонке 3 для изофокусирования. Причем градиент рН в колонке 3 распределяют поперек колонки 3. Поперек колонки 3 пропускают электрофоретический поток посредством электродов 4, Разделяемую смесь вводят периодически порциями посредством узла 5 ввода пробы и прогоняют в ламинарном потоке через колонку 3. В зависимости от заряда каждого компонента, разделяемой смеси q. и его р1.., ламинарный поток доставит их к выходу из колонки 3 за различные времена t . На выходе из колонки 3 фиксируют разделенные компоненты детектором 6, например спектрофотометром, и определяют в пробоотборники 7 о

Пример. Проводят изофокусиро- вание в ламинарном потоке в борат- полиольном градиенте с рН 4,4-8„О, которым заполняют еякость 1. Затем с помогцью микронасоса с регулятором 2 скорости устанавливают ламинарный поток в изофоретической колонке 3 с максимальной скоростью 1 мм/с. До то- roj как приступить к разделению, в колонке 3 должно установиться равновесие градиента рН поперек колонки. При длине колонки 3 равной 1 м и поперечном сечении см (5 см х 0,2 см это происходит за 40 с.

233027 .2

Причем градиент рН распределяют перп«шдикулярно ребрам, равным 0,2 см и в том же направлении пропускают электрофоретический ток, прикладьшай

5 разность потенциалов к этим ребрам колонки порядка 20-АО В, при этом Е 100-200 В/см соответственно. В качестве разделяемой смеси используют 1,0 л буферного раствора, содержащеfO го смесь альбумина (р1 5) и гемоглобина (р1 7,5) в концентрации 0,1%-, Ее вводят порциями посредством узла 5 ввода пробы и прогоняют через колонку со скоростью потока до

15 1 мм/с. Разделение первой пробы происходит через 15 мин, что фиксируют на спектрофотометре 6. Разделенные компоненты отбирают в пробирки пробоотборника 7. Для разделения 1 л

20 смеси пробу вводят порциями 40 раз, что занимает в общей сложности 6-7 ч. Почти весь альбумин (960 мг) и весь гемоглобин (980 мг) отбирают в пробирки в пять раз быстрее, чем по из25 вестному способу,

Предлагаемьй способ позволяет значительно повысить производительность процесса разделения.

30 Формул а изобретения

Способ разделения микрочастиц путем изоэлектрического фокусирования, включающий электрофорез частиц в градиенте рН в изофокусировочной колонке, отличающийся тем, что, с целью увеличения производительности разделения, элект эофорез проводят в ламинарном потоке буферного раствора, направленного вдоль колонки при гра- градиенте рН, направленном перпендикулярно широкой стенке колонки, причем электрическое поле направлено параллельно градиенту рН, а отбор фракций осуш;ествляют по времени выхода

5

их из колонки.