Способ разделения нуклеиновых кислот Советский патент 1986 года по МПК G01N30/94 

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к методу тонкослойной хроматографии, и может использоваться в аналитических исследовательских лабораториях при анлизе нуклеиновых кислот, .

Целью изобретения является упрощение способа .и повышение его селективности,

Разделение анализируемой пробы осуществляют на пластине Силуфол УФ-254, пластину погружают в 1,0- 2,0%-ный раствор аминодропилтриэток сисилана в .этиловом спирте, вьщержи вают 50-60 мин, после, чего вынимают подсушивают 20-30 мин на воздухе и промывают 1 раз этиловым спиртом.

На аминопррпилированную пластину наносят раствор анализируемого препарата с концентрацией 2-5 мг/мл и проводят развитие хроматограммы в системе 0,9-1,1 М водного раствора уксусной кислоты и этилового спирта (10:1).

Процесс развития хроматограммы осуществляют в камере (120x200 см), насьпценной в течение 10. мин парами подвижной фазы.

Пластину с развитой хроматограммо вынимают из камеры и п росматривают 1ПОД хемископом в УФ- свете, контуры пятен обводят карандашом, измеряют Rг каждого пятна, идентифицируя их по сравнению с эталонными образцами величины Rf которых определены аналогичным образом ранее.

Пример 1. На аминопропилиро- ванную пластину (5 х 10 см) Силу- фол УФ-254 наносят 4 мкл раствора уридин-5 -монофосфата в 0,1 М N%OH

9,72 0,72 0,04 0, 10

О

О

(концентрация 5 мг/мл), содержащего примеси цитидин-3 -монофосфата, аде- позин-5 -монофосфата, уридина, адёно- зина. Пластину с нанесенной на нее

анализируемой смесью помещают в камеру , насыщенную парами подвижной фазы Ш водного раствора уксусной кислоты и этанола при соотношении компонентов 10:1. Величины Ri разделенных

компонентов равны для уридин-5 - монофосфата 0; аденозин-5 -моно(Ь6с- фата 0,22; цитидин-5 -монофосфата 0,43; аденозина 0,69; уридина 0,76, Пример 2. На аминопропилированные;пластины (5x10 см) Силу-. фол УФ-254 наносят по 4 мкл смеси, содержащей аденозин, аденозин-5 -монофосфат и уридин-5 -14онофосфат в 0,1 М NHj.OH. Пластины подсущивают на

воздухе и помещают в камеру (120 х X 200 см) , насьш1енную парами применяемой подвижной фазы в течение 10 мин. Проводят восходящую хроматографию в системах растворителей при

соотношении компонентов (10:1);

1)0,25 М CHjCOOH- ; H50H;

2)0,50 М СН СООН-С НдОН; 3) 0,9 СН СООН-С Н ОН;

4) 1,0 М СН,СООН-С, Н,ОН;

3 .25

35

5) 1,1 М СН-СООН-С Н,ОН;

is

6) 2,0 М CH,,COOH-C,HsOH;

Влияние концентрации уксусной кислоты в подвижной фазе на селективно ность иллюстрируется табл.1.

0,73 0,21

О .

0,73 0,75 0,20 0,21 О О

Из данных табл,1 следует, что наилучшая селективность достигается при применении подвижной фазы 0,9- 1,1 М CHjCOOH-CjHgOH.

Применение 2М CHjCOOH в составе подвижной фазы нецелесообразно, так как высокая концентрация разрушает люминофор и фон пластины темнеет.

Пример 3. Анализ компонентов нуклеиновых кислот проводят, как в примере 1, но варьируют объемное соотношение компонентов элюирую- ; щей системы. Даннь1е по разделению анализируемых компонентов нуклеинрвьрс

кислот и величины Rr представлены в табл,2,

Влияние объемного соотношения компонентов подвижной фазы на величины Rj представлены в табл.2.

Таблица2

Величины R.B подвижной фазе 0,9-1,1 М CHjGOOH-CjH OH при соотношении компонентов

Из-табл.2 следует, что наилучшее. разделение происходит при соотношении компонентов в подвижной фазе / 10:1.

II р и м е р 4. Разделение смеси рибонуклеотидов и дезоксинуклеоти- 50 дов проводят в ПОДВИЖН.ОЙ фазе 0,9- 1,1 М CHjCGOK-CjH OH (10:1) и в подвижной фазе, используемой в известном способе 0,2 MNaCl в смеси С Н50Н-К, (30:70)

Величины R рибонуклеотидов и дезоксинуклеотидов приведены в табл , 3.

Таблица 3

to

15

20

25

Из данных табл.3 видно, что в известном способе смесь рибонуклеотидов и смесь дезоксинуклеотидов не разделяется.

Пример 5. Разделение (аналогично примеру 1) нуклеозидов и их фосфатов осуществляют в подвижной фазе 0,9-1,1 М CHgCOOH-CjHjOH при соотношении компонентов 10:1.

Величины R.f нуклеозидов и их фосфатов в системе даны в табл,4.

.Таблица 4

Изобретение относится к анайити- ческой химии, в частности к анализу нуклеиновых кислот методом тонкослойной хроматографии и может 5ыть использовано при идентификации этих кислот и сопутствующих им компонентов . Цель - упрощение и повьшение селективности способа. Анализ проводят на аминопропйлировайном силикаге- ле, используя в качестве подвижной фазы смесь 0,9-1,1 М водного раствора уксусной кислоты и этанола при соотношении компонентов 10:1. Применение 2М СИ СООН в составе подвижной фазы разрушает люминофор, и фон пластинки темнеет. Указанные условия обеспечивают хорошее разделение смеси рибо- нуклеотидов или дезоксинуклеотйдов, т.е. RJ имеют разные значения, в то время как в известном способе значения R j для разных компонентов совпадают, и поэтому разделение не достигается. 4 табл. .с € (Л С