(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОНАТНЫХ ЭФПРОВ НУКЛЕОЗИДОВ
Предлагается усовершенствованный спо собполучения фосфонатных эфиров нукле- озидов обшей формулы -Р-ОСН, № I.O. где R ciCH--, вгсн.сн-- CICH.,ьt сLZ В - ocTJaTOK аденина, урацила, структурных аналогов природных, нуклеоти дов, необходимых для биологических исследований. Известен способ получения фосфонат- ных эфиров нуклеозидов, включающий обработку соответствующих 2 ,3-О-изопро пилиденовых производных нукпеозидов хло ангидридами соответствующих фосфоновых кислот, причем в качестве хлорангидридо используют дихлорангибриды, в присутствии органического основания - пиридина,снятие изопропилиденовой защиты с помощью ОД Не раствора серной кислоты, нейтрализацию реакционной смеси гидроокисью бария и выделение продукта с помощью высоковольтного препаративного электрофореза. Выход целевого продукта 15-2О% Недостатками известного метода являются невысокий выход целевого продукта, необходимость использования для выделения целевого продукта дефицитной и дорогостоящей аппаратуры (установка высоко-, вольтного электрофореза), продолжительность способа: обработка гидроокисью бария для нейтрализации реакционной смеси, отделение сульфата бария фильтрованием. Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта и упрощение процесса. Указанная цель достигается использованием в качестве хлорангидрида фосфоноBbtx кислот монохлорангидрида, а в качестве органического основания - триэтилами- на, очисткой целевого продукта, осуществляемой перед снятием изолропиллденовой зашиты с помощью тонкослойной хроматоч график на силикагеле с 4wopecueHTHbiM индикатора с последующим снятием защиты 90%-ным раствором тр1гфторуксусной кислоты. Описывается способ получения фосфонатных эфиров нуклеозидов обшей формулы ide R ClCH2-iBrCH CH-iClCH,,CNHCH2-, в - остаток аденина, урацила, включающий обработку 2 ,3 -0-изопропил иденоБых производных нуклеоаидов обшей формулы ig. X % 3 где В имеет указанные значения, моно-; хлорангидридом фосфоновых кислот общей формулы (Ho)2P-R ГЛй R. имеет указанные значения, в присутствии триэтиламина; очистку целевого продукта осуществляют перед снятием изопропилиденовой зашиты с помо- ш.ью тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором, сня тие изопропилиденовой защиты проводят 9О%-ным раствором трифторуксусной кислоты. Выход целевого продукта 30-45%. Пример 1. Уридин-5 - р,-бромэтилфосфонат. Раствор 338 мл (2 ммоль) -бромэтилфосфоновой кислоты и 416 мг (2 ммоль) пятихлористого фосфора в Юмл абсолютного хлороформа выдерживают при комнатной температуре 30 мин без досту па вЛаги. Затем раствор упаривают и остаток высушивают в вакууме (0,О1 мм рт.ст.) при в течение 1 ч. Получен ный монохлорангидрид р -бром этилфосфоновой кислоты растворяют в 15 мл абсолютного хлороформа и к раствору добавля ют при 1 мл (7 ммоль) триэтиламина, а затем 454 мг (0,8 ммоль) 2, 3 -О-изопропилиденуридина, Реакционную смесь перемешивают 1 ч при О-5 С и 15 ч при комнатной температуре, затем упаривают до объема 1-2 мл и продукт высаживают, добавляя 100-200 мл абсолютного эфира. Дальнейшую очистку осуществляют при помощи препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором в системе метиловый спирт - хлороформ (2:3 по объему). Полосу силикагеля, содержащую про- дукт, обнаруживают по поглощению в УФсвете, высушивают и вещество элюируют метанолом. После отгонки растворителя остаток выдерживают ЗО мин в 90%-ном растворе трифторуксусной кислоты при комнатной температуре. Далее кислоту удаляют в вакууме, остаток высушивают,, затирают с абсолютным эфиром до кристаллического состояния и получают 126 мг уридин-5 - 6-бромэтилфосфоната, выход 40%. Найдено, %: С 29,52; Н 4,63; Р 6,69. C,H gMjOgBbP- 2НаО Вычислено, %: С 29,34; Н 4,44; Р 6,88. Соединение охарактеризовано хромато- графической подвижностью в системах: н-бутнловъ1Й спирт - уксусная кислота вода (5:2:3 по объему), Р О,34, изопрсшиловый спирт концентрированный, аммиак - вода (7:1:2 по объему), R 0,48. Соединение охарактеризовано электро- форетической подвижностью относительно уридин-5 -монофосфата в системах; уксусная кислота - 0,05 М ацетат аммония (рН 6,5), Е , 0,7; триэтиламмоний - бикарбонатный буфер (рН 7,5),Е О,5 Пример 2. Аденозин-5 - п-хлорац етилам ином етилфосфонат. Раствор 375 мг (2 ммоль) -хлорацетиламинометилфосфоновой кислоты и 416 мг (2 ммоль) пятихлористого фосфора в 1О мл абсолютного хлороформа выдерживают при комнатной температуре ЗО мин без Доступа влаги- Затем раствор упаривают и остаток высушивают Б вакууме (0,01 мм рт.ст.) при в течение 1 ч. Полученный монохлоран1-идрид N -хлорацетиламинометилфосфоновой кислоты растворяют в 15 мл абсолютного хлороформа и к раствору добавляют при О5 С 1 мл (7 ммоль) триэтиламина, а затем 246 мг (0,8 ммоль) 2 ,3 -О-изо- пропилиденаденозина. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при и 15 ч при комнатной температуре, затем упаривают до объема 1-2 мл и продукт высажиЕШют, добавляя 10О-2ОО мл абсолютного эфира, Дальнейшую очистку осуществляют при помощи препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором в системе метиловый спирт - хлороформ (3:1 по объему). Полосу силикагеля, содержащую продукт, обнаруживают по поглощению в УФ-свете, высушивают и вещество элюируют метанолом. После отгонки растворителя остаток выдерживают 30 мин в 1 мл раствора трифторуксусной кислоты при комнатной температуре. Далее кислоту удаляют в вакууме, остаток высушивают затирают с абсолютным эфиром до кристаллического состояния и получают 146мг аденозин-5 - -хлорацетиламинометилфос- фоната, выход 32%, Найдено, %: С 34,59; Н 4,51; Р 6,97 Вычислено, %: С 34,34; Н 4,43; Р 6,81. Соединение охарактеризовано хромато- графической подвижностью в системе н- бутиловый спирт - уксусная кислота - вода (5:2:3 по объему), R 0,32, Соединение охарактеризовано электрофоретической подвижностью относительно аденозин-5-монофосфата в системе уксусная кислота - 0,05 М ацетат аммония (рН 6,5), Е 0,7. Пример 3. Аденозин-5 -хлорметилфосфонат. Раствор 130 мг (1 ммоль) хлорметил- фосфоновой кислоты и 2О8 мг (1 ммоль) пятихлористого фосфора в 5 мл абсолютного хлороформа выдерживают при комнатной температуре 30 мин без доступа влаги. Затем раствор упаривают и остаток высушивают в вакууме (0,01 мм рт.ст.) при 50 С в течение 1 ч. Полученный монохлорангидрид хлорметилфосфоновой кислоты растворяют в 8 мл абсолютного хлороформа и к раствору добавляют при 0-51 0,5 мл (3,5 ммоль) триэтиламина, а затем 123 мг (0,4 ммоль) 2,3 -О-изопропилиденаденозина. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при 0-5 С и 15 ч при комнатной температуре, затем упаривают до объема 1-2 мл н продукт высаживают, добавляя 1ОО-2.00 мл абсолютного . Дальнейшую очистку осуществляют при помощи препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцент- ным индикатором в системе метиловый спирт - хлороформ (2:3 по.объему). Полосу силикагеля, содержащую продукт, определяют по поглощению в УФ-свете, высушивают и вещество элюируют метанолом. После отгонки растворителя остаток выдерживают ЗО мин в 0,5 мл 9О%-ного раствора трнфторуксусной кислоты при комнатной температуре. Далее кислоту удаляют в вакууме, остаток высущивают, затирают с абсолютным эфиром до кристаллического состояния и получают 186 мг аденозин-5 -хлорметилАосфоната, выход 45%. Найдено, %: С 32,О2; Н 4,76; Р 7,18, С 4 15 50бССР Вычислено, %: С 31,77; Н 4,60; Р 7,45. Соединение охарактеризовано хроматографической подвижностью в системах н-бутиловый спирт - уксусная кислота вода (5:2:3 по объему), Р. 0,34; изо- пропиловый спирт - концентрированный аммиак - вода (7:1:2 по объему), Р, 0,49. Соединение охарактеризовано электрофоретической подвижностью относительно аденозин-5-монофосфата в системах: уксусная кислота - О,О5 М ацетат аммония (рН 6,6), Ef 0,7; триэтиламмоний-бикарбонатньш буфер (рН 7,5) Е, 0,5. Формула изобретения Способ получения фосфонатных эфиров нуклеозидов общей формулъг R-P-OCH, I i TJ I « где 11 , , CICH CNHCH - , в - остаток аденина, урацила, включающий обработку 2 ,3 -О-изопропи- лиденовых производных нуклеозидов общей формулы НОСНг о W % сн.
где Вимеет указанные значения, хлорангидридом фосфоновых кислот щей .формулы
О
(но)„р-к ,
где R имеет указанные значения, в присутствии органического основания, снятие изопропилиденовой зашиты и очистку целеёого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и увеличения выхода целевого продукта, в качестве хлорангидрида фосфоновых кислот используют монохлорангидрид, в качестве органического основания - триэтилами}, очистку целевого продукта осуществляют перед снятием изо- пропнпиденовой защиты с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором, а последующее снятие защиты проводят 9О%-ным раствором трифторуксусной кислоты.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
