Способ получения целлюлолитического ферментного комплекса из фильтрата культуральной жидкости гриба @ @ @ @ 2220 Советский патент 1986 года по МПК C12N9/42 C12N9/42 C12R1/66 

1

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к способу получения целлюлолитического комплекса ферментов гриба Aspergillus terreus ВКМ F 2220..

Цель изобретения - повьшение выхода и удешевление процесса.

Сущность способа заключается в том, что в качестве сорбента для извлечения целлюлолитического комп- лекса гриба А.terreus ВКМ F 2220, состоящего из пяти ферментов (двух целлобйаз и трех экдоглюканаз) используется карбоксильньй катионит типа КМТ или КРК, или Биокарб, или КМ 2п, в то время как в известном способе - сульфопропильньш катионит sp-сефадекс (фирма Pharmacia; карбоксиметильный катионит фирмы Pharmacia можно использовать только для извлечения деллобваз, остальные компоненты комплекса на нем не сорбируются). Сорбцию ведут при рН 4,0- 4,5.

Пример 1. Гриб. А.terreus ВКМ F 2220 выращивают, мицелий отфильтровывают и отбрасывают. Целлю- лолитический комплекс ферментов из фильтрата культуральной жидкости гриба сорбируют на колонке с карбо- ксильным катионитом КМТ 24 в 0,01 М ацетатном буфере при рН 4,0 со скоростью 150 МП/см Ч. Промывают исходным буфером (2,5 л/л сорбента) и затем элюируют 1М раствором ацетата натрия. Комплекс элюируется в интервале рН 4,6-5,6 с выходом 100%.

Пример 2. Целлюлолитический комплекс ферментов из фильтрата культуральной жидкости сорбируют на катионите КРК 1-8п в 0,05 М ацетатном буфере при рН 4,5 со скоростью 100 мп/см ч. Промывают 0,05 М ацетатным буфером рН 4,5 (2,5 л/.гт COD-, бента). Затем комплекс элюируют 2М ацетатом натрия со скоростью 51 мл/см г ч. Комплекс ферментов элюируется в интервале концентрации элюирующего раствора 0,4-1М с выходом 100%,- при этом удаляется 99% балластного белка.

ВНИИПИ Заказ 3668/26 Тираж 490 Подписное Пронзв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

I

Удельная активность препарата, ед./г:;

Эндоглюканаза Экзоглюкозидаза Целлобйаза

Пример 3. Полученный, как описано в примере 2, комплекс подвергают дополнительной очистке, как описано в примере 1. Выход 100%.

Удельная активность препарата, ед./г;:

Эндоглюканаза 21000 Экзоглюкозидаза 274 Целлобиаза 220

Пример 4. Целлюлолитический комплекс гриба Asp. terreus ВКМ 2220 -получают, как описано в примере 1, на колонке с карбоксильным катионитом Биокарб Г-15. Выход целлюлолитического комплекса 100%.

Пример 5. Целлюлолитический комплекс гриба Asp. terreus ВКМ 2220 получгаот, как описано в примере 2, на колонке с катионитом КМ 2п. Выход целлюлолитического комплекса 100%.

Результаты аналогичные приведенным в примерах 1 ,2,, 4 и 5 - выход целлюлолитического комплекса 100%, получены при использовании различных марок катионитов типа КМТ, типа КРК, типа Биокарб, а именно: типа КМТ - КМТ, КМТ-24; типа КРК - КРК-1-1п, КРК-1-2П, КРК-1-5П, КРК-1-8П, КРК-1- -12п, КРК-1-16п,КРК-Г-20п, КРК-1-24п, КРК-1-20т-100; типа Биокарб - Биокар- бы Г-5, Г-:8, Г-10, Г-15, Г-20, Г-40, Э-5, Э-8, Э-10, Э-15, Э-20, Э-40, Биокарб Д.

Использование предлагаемого способа позволит увеличить выход с 82 до 100% и снизить затраты на сорбенты .для хроматографии, вследствие чего снизитсяt стоимость сорбента для получения комплекса ферментов. Кроме того использование сорбентов на твердой основе позволяет увеличить скорость протока через колонку с 1,5-5,1 до 100-150 мл/см ; ч и, таким образом, сократить время очистки препарата ферментов.