Способ получения целлюлолитических ферментов Советский патент 1983 года по МПК C12N9/42 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения целлюлолитических ферментов, используемых в процессе оса харивания целлюлозы. Известен способ получения целлюпблитических ферментов, предусматривающих культивирование гриба Aspercg Pgus ierreus 17 Р на измельченных до раснмероБ 1-60 мкм целлюлозосодержащих субстратах. В качестве субстрата используют солому и гузапаю Clj . Известен способ получения целлюлоаитических ферментов, предусматривающий культивирование грибов вида Д5регч Cus -terreus на питательной среде, содержащий органический источник азота, минеральные соли и древесные опилки в качестве источника углерода. Исполь зуют штамм AsperofiPEos terreusl7 P. С и Су - активности составляют при этом 6,2 и 2,4 мг глюкозы / мл-ч 2

ФЕРМЕНТОВ. . Недостатком данного способа 5тляется невысокая активность целлюлолитических ферментов. Цель изобретения - увеличение акти1 кости ферментов. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения целлюлоли- тических ферментов, предусматривающему культивирование грибов вида /i|sf)evtri€Cu5 terreus на питательной среде, содержащей органический источник азота, минеральные соли и древесные опилки в качестве источника углерода, предложено в качестве продуцента использовать штамм flspertfieeosterreos ВКМ F 222О Д, древесные опилки измельчать до размера частиц 0,2-1,0 мм. Штамм sperofi BEos ierreos ВКМ JF-222P Д выделен из лесной почвы Серпуховского района Московской области. Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов. Штамм Asperj iRftus terreosBKM F 2 2 2ОД имеет следующую характеристику. 399 Культуральные признаки. Среда Чапека. На 9 сут при колония достигает в диаметре 7 см; край колени ров ный, поверхность бархатистая, центральная часть сморщенно-приподнятая; цвет колонии светло-коричневый, обратная сто рона коричневого цвета, пигмент в среду не диффундирует. Сусло-агар. Рост культуры на суслоагаре отличается от роста на среде Чапека наличием скудного эксудата, центр колонии приподнят в месте укола, обратная сторона цвета среды. Морфолстические признаки. Среда Чапека. Конидиальные головки длинные, колончато-компактные ЗО-5Оч8О-150 yU конидиеносцы отходят от субстрата гладкие, бесцветные 5-8 110140yU-} верхушечный пузырь полусферический 14- 18 / в диаметре, покрыт стеригмами на 2/3 своей поверхности; стеригмы двурядные, первичные стеригмы 2-2,5) .x7-8yu; , вторич|&1е - 2-2,5.7,5-8,5уЫ.; конидии эллиптические, гладкие 1,62,2уа в диаметре. Сусло-агар. На сусло-агаре наблюдаются отличия в размерах некоторых .структур: конидиальная головка 30-5О Х80-20О/Х-; конидиеносец 5-8 11О180/XJ диаметр верхушечного пузыря 10-16 д, первичные стеригмы 2-2,5 У х5,5-7д1- , вторичные - 2-2,5 6-8/х ; диаметр конидий 1,6-2,2 уи. . Триб А5рего |№У5 terreus ВКМ П-222б Д способен расти на средахс минеральными источниками азота, используя древесные опилки в качестве единственного источника углерода Шташ не нуждается в витаминах и других биологически-активных ватцествах. При- использовании органических добавок активность целлюлаз в культуральной среде увеличивается. Измельчение опилок до размеров 0,1-1,0 мм оказывает стимулирующее действие на синтез целлюлаз.: Пример. Гриб spert ieeus ierreu ВКМ F-222О Д выращиваютна среде, содержащей , г/л: измельченные на шаровой мельнице до размеров 0,2-1,0 мм березовые опилки 20,0; NO N03 2,5; КН2РО4 2,0; Сс(Се20,3; М 804-7Н2О О,3; дрожжевой автолизат - 0,5; рН 5,5-6,0. Посевной материал выращивают предварительно в течение 2 сут при 40С в колбах на 75О мл с объемом среды 100 мл на качалке при 180 об/мин на среде, содержащей, г/л: лактоза 54 .lp,0| NUNOj 2,5; КН2Р04 2 Oj Cbce/j 0,3; -MtfSO THjO 6,3; дрожжевой автолизат ;0,5; рН 5,5-6,О. Посевной материал в количестве 10% добавляют в среду ферментации и инкубируют при на качалке 180 об/мин в колбах на 750 мл с объемом среды 1ОО мл в течение 3 сут. Культуральная среда, отделенная от био массы гриба и неиспользованного субстрат, та центрифугированием (5ООО об/мин, 15 мин), содержит активный комплекс целлюлйа С и Сц. - активность культуральной жидкости составляет соотвеТственно 1,5 и 40 мг глюкозы / мл.ч (активность. измеряют по методу Мапбейз et e.,eiotechnoe. ап Bioeno;. Samp., 6, 21-33, 1976; редуцирующие сахара определяли по методу Somoc vi M-J. BioB. Cliem. 195, 19-23, 1952). Эндоглюканазная и целлобиазная активность культуральной жидкости составляет соответственно 1,0 и 0,05 мкмоль/млмин (активность измеряют по методу А. А. Кле. сова и сотр.Биоорг. химия, 6, № 8, 1980, 1225-1242). П р и м е р 2 ,Гриб spertfie u5 tert-eus ВКМ F -222ОД выращивают на среде, содержащей, г/л: измельченные на шаровой мельнице до размеров 0,2-1,0 мм березовые опилки 2О,О; NaNO 2,5; KHgPOij 2,0; белково-витаминный концентрат 5,0. Посевной материал выращивают и добавляют в среду ферма 1тации аналогично примеру 1. Культуральная среда, отделенная через 2 сут выращивания, содержит более активный комплекс целлюлаз: С и С активности составл яют соответственно 3,5 и 100 мг ГЛЮКОЗЫ/МЛ1 ч, эндоглюканазная и целлобиазная активность 4,0 и О,1 МКМОЛЬ/МЛМИН, Таким образом, описанный способ поэ воляет повысить выход целлюлаз при использовании древесных опилок в качестве источника углерода в 1О-20 раз по С -активности и в 15-4О раз по Cj( -активности. ормула изобретения Способ получения целлюлолитических ферментов, предусматривающий культивирование грибов вида flsperc iCBus terreus на питательной среде, содержащей органический источник азота, минеральные соли и древесные опилки в качестве источника углерода, отличающий5 .994555 6

с я тем. что, с целью повышения акги&- i. Авторское свидетельство СССР

юхуги ферментов, в качестве продуцента№ 77222О, кл. С 12 N 9/42

STpppr r reus.2. Зелтинь P. П.,Витола Г/А.. ЭдBKM-F-2220 Д. при этом древесныежинь И. М. Биосинтад целлюлолитичесопилм нзкюльчают да размера частицs ких ферментов грибом pev ifeos ierr««s

17 Р при культивирования его в Bonjw

Источники инфоршции,производственных усЛовнязс. - В га, Ферпринятые во внимание при экспертизементация, Рига, -Зи атне. .5-1оГ